华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2006年
5期
400-403
,共4页
许静%李昂%苟建重%许援朝%饶国洲%刘蒸%谢红帼
許靜%李昂%茍建重%許援朝%饒國洲%劉蒸%謝紅幗
허정%리앙%구건중%허원조%요국주%류증%사홍귁
牙龈卟啉单胞菌%蛋白酶%原核表达
牙齦卟啉單胞菌%蛋白酶%原覈錶達
아간계람단포균%단백매%원핵표체
目的 克隆牙龈卟啉单胞菌精氨酸牙龈素催化结构域(RgpAcd)基因,并将其置于大肠杆菌中作融合表达.方法 利用PCR技术和基因重组技术,克隆牙龈卟啉单胞菌RgpAcd,然后插入中介载体pMD18-T中并测序鉴定.将目的 基因片段插入原核表达载体pET-15b来构建表达质粒pET-15b/RgpAcd.重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.结果 核酸序列测定与分析的结果表明,克隆的1 476 bp基因序列与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性;IPTG诱导后的菌体经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后有一个相对分子质量为5×104的融合表达蛋白产生.结论 本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌RgpAcd基因,并在大肠杆菌中表达了RgpAcd蛋白,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础.
目的 剋隆牙齦卟啉單胞菌精氨痠牙齦素催化結構域(RgpAcd)基因,併將其置于大腸桿菌中作融閤錶達.方法 利用PCR技術和基因重組技術,剋隆牙齦卟啉單胞菌RgpAcd,然後插入中介載體pMD18-T中併測序鑒定.將目的 基因片段插入原覈錶達載體pET-15b來構建錶達質粒pET-15b/RgpAcd.重組原覈錶達質粒經酶切鑒定後轉化大腸桿菌BL21感受態細胞,以異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達融閤蛋白.結果 覈痠序列測定與分析的結果錶明,剋隆的1 476 bp基因序列與GenBank數據庫中的序列呈現100%同源性;IPTG誘導後的菌體經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳後有一箇相對分子質量為5×104的融閤錶達蛋白產生.結論 本實驗成功剋隆瞭牙齦卟啉單胞菌RgpAcd基因,併在大腸桿菌中錶達瞭RgpAcd蛋白,為進一步研製重組活載體疫苗奠定瞭基礎.
목적 극륭아간계람단포균정안산아간소최화결구역(RgpAcd)기인,병장기치우대장간균중작융합표체.방법 이용PCR기술화기인중조기술,극륭아간계람단포균RgpAcd,연후삽입중개재체pMD18-T중병측서감정.장목적 기인편단삽입원핵표체재체pET-15b래구건표체질립pET-15b/RgpAcd.중조원핵표체질립경매절감정후전화대장간균BL21감수태세포,이이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체융합단백.결과 핵산서렬측정여분석적결과표명,극륭적1 476 bp기인서렬여GenBank수거고중적서렬정현100%동원성;IPTG유도후적균체경SDS-취병희선알응효전영후유일개상대분자질량위5×104적융합표체단백산생.결론 본실험성공극륭료아간계람단포균RgpAcd기인,병재대장간균중표체료RgpAcd단백,위진일보연제중조활재체역묘전정료기출.
