生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
273-277
,共5页
谷维娜%杨培龙%王亚茹%罗会颖%孟昆%伍宁丰%姚斌%范云六
穀維娜%楊培龍%王亞茹%囉會穎%孟昆%伍寧豐%姚斌%範雲六
곡유나%양배룡%왕아여%라회영%맹곤%오저봉%요빈%범운륙
植酸酶%定点突变%毕赤酵母
植痠酶%定點突變%畢赤酵母
식산매%정점돌변%필적효모
Aspergillus fumigatus来源的植酸酶具有热稳定性好、pH作用范围广的优点,但其比活性很低.设计的植酸酶Q23L突变能在pH 4.5～7.0范围内大幅提高比活性,但pH稳定性却显著下降,为了进一步改良Q23L的pH稳定性,在Q23L分子上加入了G272E突变.将原酶、突变酶Q23L和突变酶Q23LG272E分别在毕赤酵母GS115中表达,表达酶经纯化后进行酶学性质比较分析,结果表明:突变酶Q23L的比活性比原酶显著提高,在pH5.5比活性由51u/mg提高到109u/mg,但其pH稳定性,尤其是在pH 3.0～4.0酸性条件下的稳定性却显著降低,低于80%.突变酶Q23LG272E在pH 3.0～4.5和pH 6.5～7.0时的稳定性比Q23L有所提高,恢复到原酶的水平,而比活性基本维持在Q23L的水平.通过一级序列和三维结构比较,分析了可能影响Q23LG272E酶学性质的因素,为进一步研究植酸酶的结构与功能提供了材料.
Aspergillus fumigatus來源的植痠酶具有熱穩定性好、pH作用範圍廣的優點,但其比活性很低.設計的植痠酶Q23L突變能在pH 4.5～7.0範圍內大幅提高比活性,但pH穩定性卻顯著下降,為瞭進一步改良Q23L的pH穩定性,在Q23L分子上加入瞭G272E突變.將原酶、突變酶Q23L和突變酶Q23LG272E分彆在畢赤酵母GS115中錶達,錶達酶經純化後進行酶學性質比較分析,結果錶明:突變酶Q23L的比活性比原酶顯著提高,在pH5.5比活性由51u/mg提高到109u/mg,但其pH穩定性,尤其是在pH 3.0～4.0痠性條件下的穩定性卻顯著降低,低于80%.突變酶Q23LG272E在pH 3.0～4.5和pH 6.5～7.0時的穩定性比Q23L有所提高,恢複到原酶的水平,而比活性基本維持在Q23L的水平.通過一級序列和三維結構比較,分析瞭可能影響Q23LG272E酶學性質的因素,為進一步研究植痠酶的結構與功能提供瞭材料.
Aspergillus fumigatus래원적식산매구유열은정성호、pH작용범위엄적우점,단기비활성흔저.설계적식산매Q23L돌변능재pH 4.5～7.0범위내대폭제고비활성,단pH은정성각현저하강,위료진일보개량Q23L적pH은정성,재Q23L분자상가입료G272E돌변.장원매、돌변매Q23L화돌변매Q23LG272E분별재필적효모GS115중표체,표체매경순화후진행매학성질비교분석,결과표명:돌변매Q23L적비활성비원매현저제고,재pH5.5비활성유51u/mg제고도109u/mg,단기pH은정성,우기시재pH 3.0～4.0산성조건하적은정성각현저강저,저우80%.돌변매Q23LG272E재pH 3.0～4.5화pH 6.5～7.0시적은정성비Q23L유소제고,회복도원매적수평,이비활성기본유지재Q23L적수평.통과일급서렬화삼유결구비교,분석료가능영향Q23LG272E매학성질적인소,위진일보연구식산매적결구여공능제공료재료.
