临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
臨床耳鼻嚥喉頭頸外科雜誌
림상이비인후두경외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL OTORHINOLARYNGOLOGY HEAD AND NECK SURGERY
2007年
4期
172-175
,共4页
付勇%龚树生%薛秋红%刘英鹏%鄢开胜
付勇%龔樹生%薛鞦紅%劉英鵬%鄢開勝
부용%공수생%설추홍%류영붕%언개성
神经干细胞%细胞培养%胚胎大鼠
神經榦細胞%細胞培養%胚胎大鼠
신경간세포%세포배양%배태대서
目的:探索胚胎大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记的方法.方法:分离胚胎大鼠海马组织,用无血清培养技术培养神经干细胞,免疫组织化学荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;5-溴脱氧尿嘧啶(BrDU)掺入试验,并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况.采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞并诱导其分化,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学荧光染色鉴定分化细胞.结果:①获得大量未分化呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并能分化为神经元和神经胶质细胞,且经传代培养8代后仍具干细胞特性;②荧光染料的标记率可达97%,细胞传8代后荧光亮度无明显衰减,并且分化后的细胞核中仍有荧光表达.结论:成功培养出胚胎大鼠神经干细胞,培养出的细胞具有增殖、自我更新及核多潜能分化能力,可分化为神经元及神经胶质细胞;荧光染料的标记可获得较高的标记率,可作为神经干细胞移植实验研究的供体细胞.
目的:探索胚胎大鼠神經榦細胞的分離培養、鑒定及標記的方法.方法:分離胚胎大鼠海馬組織,用無血清培養技術培養神經榦細胞,免疫組織化學熒光技術檢測其巢蛋白(Nestin)的錶達;5-溴脫氧尿嘧啶(BrDU)摻入試驗,併用免疫熒光雙標技術觀測神經榦細胞的增殖狀況.採用熒光染料Hoechest33342標記神經榦細胞併誘導其分化,用神經元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質纖維痠性蛋白(GFAP)免疫組織化學熒光染色鑒定分化細胞.結果:①穫得大量未分化呈巢狀懸浮生長的神經榦細胞糰,併能分化為神經元和神經膠質細胞,且經傳代培養8代後仍具榦細胞特性;②熒光染料的標記率可達97%,細胞傳8代後熒光亮度無明顯衰減,併且分化後的細胞覈中仍有熒光錶達.結論:成功培養齣胚胎大鼠神經榦細胞,培養齣的細胞具有增殖、自我更新及覈多潛能分化能力,可分化為神經元及神經膠質細胞;熒光染料的標記可穫得較高的標記率,可作為神經榦細胞移植實驗研究的供體細胞.
목적:탐색배태대서신경간세포적분리배양、감정급표기적방법.방법:분리배태대서해마조직,용무혈청배양기술배양신경간세포,면역조직화학형광기술검측기소단백(Nestin)적표체;5-추탈양뇨밀정(BrDU)참입시험,병용면역형광쌍표기술관측신경간세포적증식상황.채용형광염료Hoechest33342표기신경간세포병유도기분화,용신경원특이성희순화매(NSE)、효질섬유산성단백(GFAP)면역조직화학형광염색감정분화세포.결과:①획득대량미분화정소상현부생장적신경간세포단,병능분화위신경원화신경효질세포,차경전대배양8대후잉구간세포특성;②형광염료적표기솔가체97%,세포전8대후형광량도무명현쇠감,병차분화후적세포핵중잉유형광표체.결론:성공배양출배태대서신경간세포,배양출적세포구유증식、자아경신급핵다잠능분화능력,가분화위신경원급신경효질세포;형광염료적표기가획득교고적표기솔,가작위신경간세포이식실험연구적공체세포.
