中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
3期
202-204,209
,共4页
罗孟成%陶攀%肖庚富%潘兹书
囉孟成%陶攀%肖庚富%潘玆書
라맹성%도반%초경부%반자서
H5N1 A型流感病毒%核蛋白NP%原核表达%多克隆抗体
H5N1 A型流感病毒%覈蛋白NP%原覈錶達%多剋隆抗體
H5N1 A형류감병독%핵단백NP%원핵표체%다극륭항체
目的 制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体.方法 以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板, PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus (DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达.采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性.结果 与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础.
目的 製備H5N1亞型禽流感病毒NP重組蛋白和抗體,為研製含NP組分的人禽流感亞單位疫苗和建立評價方法提供檢測抗原和抗體.方法 以H5N1亞型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA剋隆質粒pMD-NP為模闆, PCR擴增穫得NP基因抗原區片段,剋隆到原覈錶達載體pET-28a,構建重組質粒pET-ΔNP,轉化大腸桿菌BL21-CondonPlus (DE3)-RIL,IPTG誘導重組蛋白錶達.採用Ni親和層析方法純化NP重組蛋白,免疫傢兔,收集免疫血清,ELISA測定抗體效價;間接免疫熒光檢測所製備抗體與真覈細胞錶達NP蛋白的反應性.結果 與結論成功的製備瞭高效價兔抗NP抗體,抗體效價在105以上,該抗體能與原覈和真覈繫統中錶達的NP蛋白特異性反應,為研製以NP蛋白為抗原組分的人禽流感亞單位疫苗和建立評價方法奠定瞭基礎.
목적 제비H5N1아형금류감병독NP중조단백화항체,위연제함NP조분적인금류감아단위역묘화건립평개방법제공검측항원화항체.방법 이H5N1아형금류감병독A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP기인cDNA극륭질립pMD-NP위모판, PCR확증획득NP기인항원구편단,극륭도원핵표체재체pET-28a,구건중조질립pET-ΔNP,전화대장간균BL21-CondonPlus (DE3)-RIL,IPTG유도중조단백표체.채용Ni친화층석방법순화NP중조단백,면역가토,수집면역혈청,ELISA측정항체효개;간접면역형광검측소제비항체여진핵세포표체NP단백적반응성.결과 여결론성공적제비료고효개토항NP항체,항체효개재105이상,해항체능여원핵화진핵계통중표체적NP단백특이성반응,위연제이NP단백위항원조분적인금류감아단위역묘화건립평개방법전정료기출.
