CAJ | 학술논문

研究了水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFF)转染外源基因后的细胞生物学特性.纯化含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和新霉素抗性基因的线性化载体,用脂质体法转染体外培养3代的BFF细胞,应用抗生素G418筛选2周后挑取转基因抗性细胞集落扩大培养.结果发现:经过G418筛选后细胞增殖活力下降,胰蛋白酶消化法共分离获得162个转基因水牛阳性细胞集落,转移到24孔板扩大培养后,132个(85.2%)细胞集落可以存活,转移到4孔板中后仅有52个(32.1%)细胞集落能继续生长,最终能在35 mm培养皿中大量培养的只有15个(<9.3%).抗性细胞由梭形、成簇生长变为多角形、不规则形弥漫生长,立体感减弱,细胞生长速度减慢,活力下降.染色体核型异常率增加,10个抗性细胞集落核型正常率平均为61%,显著低于对照组86.7%(P<0.01).研究结果为建立和优化BFF细胞转染外源基因平台奠定了工作基础.
연구료수우태인성섬유세포(buffalo fetal fibroblasts,BFF)전염외원기인후적세포생물학특성.순화함유록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)화신매소항성기인적선성화재체,용지질체법전염체외배양3대적BFF세포,응용항생소G418사선2주후도취전기인항성세포집락확대배양.결과발현:경과G418사선후세포증식활력하강,이단백매소화법공분리획득162개전기인수우양성세포집락,전이도24공판확대배양후,132개(85.2%)세포집락가이존활,전이도4공판중후부유52개(32.1%)세포집락능계속생장,최종능재35 mm배양명중대량배양적지유15개(<9.3%).항성세포유사형、성족생장변위다각형、불규칙형미만생장,입체감감약,세포생장속도감만,활력하강.염색체핵형이상솔증가,10개항성세포집락핵형정상솔평균위61%,현저저우대조조86.7%(P<0.01).연구결과위건립화우화BFF세포전염외원기인평태전정료공작기출.