中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2012年
2期
109-113
,共5页
杨明珍%刘飞%宋玲%刘蒙%夏雷鸣
楊明珍%劉飛%宋玲%劉矇%夏雷鳴
양명진%류비%송령%류몽%하뢰명
雷帕霉素%CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞%IL-10%TGF-β1
雷帕黴素%CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞%IL-10%TGF-β1
뢰파매소%CD4+CD25+Foxp3+조절성T세포%IL-10%TGF-β1
目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法.方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量.结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P＜0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P＜0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P＜0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P＜0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P＜0.001).结论:小鼠CD4+T细胞在含有1 μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞.
目的:本研究旨在探討CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞體外擴增的方法.方法:採用磁珠分選小鼠CD4+T細胞,αCD3單剋隆抗體包被24孔闆,加入αCD28單剋隆抗體、雷帕黴素、rhIL-2,培養3週後,流式細胞儀測定培養細胞中CD4+CD25+T細胞的含量,實時定量PCR檢測CD4+CD25+T細胞Foxp3 mRNA的錶達;單嚮混閤淋巴細胞反應和增殖抑製試驗測定擴增的CD4+CD25+T細胞的增殖及其抑製功能;ELISA檢測培養上清中IL-10和TGF-β1的含量.結果:小鼠CD4+T細胞培養3週後,CD4+CD25+T細胞達(76.05±2.73)%,高于未加雷帕黴素組(52.17±1.36)%(P＜0.001),磁珠分選的CD4+CD25+T細胞Foxp3 mRNA的錶達是未加雷帕黴素組的5倍(P＜0.001),增殖能力是未加雷帕黴素組的0.29倍(P＜0.001),對CD4+T細胞增殖抑製能力是未加雷帕黴素組的3.6倍(P＜0.001),培養上清中IL-10和TGF-β1分彆是對照組的1.8倍和1.6倍(P＜0.001).結論:小鼠CD4+T細胞在含有1 μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和終濃度為10 nmol/L雷帕黴素的培養體繫中培養3週後能有效擴增CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞.
목적:본연구지재탐토CD4+CD25+Foxp3+조절성T세포체외확증적방법.방법:채용자주분선소서CD4+T세포,αCD3단극륭항체포피24공판,가입αCD28단극륭항체、뢰파매소、rhIL-2,배양3주후,류식세포의측정배양세포중CD4+CD25+T세포적함량,실시정량PCR검측CD4+CD25+T세포Foxp3 mRNA적표체;단향혼합림파세포반응화증식억제시험측정확증적CD4+CD25+T세포적증식급기억제공능;ELISA검측배양상청중IL-10화TGF-β1적함량.결과:소서CD4+T세포배양3주후,CD4+CD25+T세포체(76.05±2.73)%,고우미가뢰파매소조(52.17±1.36)%(P＜0.001),자주분선적CD4+CD25+T세포Foxp3 mRNA적표체시미가뢰파매소조적5배(P＜0.001),증식능력시미가뢰파매소조적0.29배(P＜0.001),대CD4+T세포증식억제능력시미가뢰파매소조적3.6배(P＜0.001),배양상청중IL-10화TGF-β1분별시대조조적1.8배화1.6배(P＜0.001).결론:소서CD4+T세포재함유1 μg/ml적αCD28、rhIL-2 100 U/ml화종농도위10 nmol/L뢰파매소적배양체계중배양3주후능유효확증CD4+CD25+Foxp3+조절성T세포.
