CAJ | 학술논문

目的:制备PON2(paraxonase2)单克隆抗体(mAb),并进行初步鉴定.方法:利用生物信息学方法分析人类PON2蛋白序列,选取与小鼠同源性低,而免疫原性与亲水性均较强的片段,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PON2和PET-32a-PON2,GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白在大肠杆菌中进行表达, 以HIS-PON2作为免疫原制备鼠mAb,以GST-PON2作为筛选抗原.采用Western blot、间接免疫荧光鉴定mAb的特异性.结果:GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白均在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗PON2的杂交瘤细胞株,这2株抗体可以识别HepG2细胞中的靶蛋白.结论:成功制备出2株抗PON2的mAb,并通过免疫荧光技术检测了该蛋白在HepG2细胞中的分布,为进一步进行PON2蛋白的的研究提供了有效的工具.
목적:제비PON2(paraxonase2)단극륭항체(mAb),병진행초보감정.방법:이용생물신식학방법분석인류PON2단백서렬,선취여소서동원성저,이면역원성여친수성균교강적편단,구건중조표체질립pGEX-4T-1-PON2화PET-32a-PON2,GST-PON2화HIS-PON2융합단백재대장간균중진행표체, 이HIS-PON2작위면역원제비서mAb,이GST-PON2작위사선항원.채용Western blot、간접면역형광감정mAb적특이성.결과:GST-PON2화HIS-PON2융합단백균재대장간균중획득고효표체,경상규적세포융합화사선획득2주가은정분비항PON2적잡교류세포주,저2주항체가이식별HepG2세포중적파단백.결론:성공제비출2주항PON2적mAb,병통과면역형광기술검측료해단백재HepG2세포중적분포,위진일보진행PON2단백적적연구제공료유효적공구.