CAJ | 학술논문

本研究目的是繁育和鉴定prdm1基因敲除的小鼠,为进一步研究Blimp-1蛋白的功能奠定基础.将所引进的2种转基因纯合子小鼠B6.prdm1flox/flox和B6.Lck-Cre进行饲养并繁殖,繁殖成功后获得第1代小鼠,将第1代小鼠再次进行交配获得基因型为:B6.prdm1wild/wild.Lck-Cre、B6.prdm1wild/wild、B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre、B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6.prdm1flox/wild.提取第2代小鼠基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增Cre和loxp基因片段后琼脂糖凝胶电泳分别检测cre和loxp基因组DNA的大小.取基因型为B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre即为条件性基因prdm1敲除小鼠,选择B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6小鼠作为对照,应用磁珠分选脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞,并应用Western blot方法检测Blimp-1目的蛋白.结果表明,2种转基因纯合子小鼠均有繁殖能力,其子代相互繁殖后第2代小鼠分离比例基本符合孟德尔遗传规律,亦可以成功获得较多的prdm1基因敲除小鼠.结论:应用Cre-loxp系统可以成功地获得prdm1基因敲除的小鼠.
본연구목적시번육화감정prdm1기인고제적소서,위진일보연구Blimp-1단백적공능전정기출.장소인진적2충전기인순합자소서B6.prdm1flox/flox화B6.Lck-Cre진행사양병번식,번식성공후획득제1대소서,장제1대소서재차진행교배획득기인형위:B6.prdm1wild/wild.Lck-Cre、B6.prdm1wild/wild、B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre、B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6.prdm1flox/wild.제취제2대소서기인조DNA,응용취합매련반응(PCR)확증Cre화loxp기인편단후경지당응효전영분별검측cre화loxp기인조DNA적대소.취기인형위B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre즉위조건성기인prdm1고제소서,선택B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6소서작위대조,응용자주분선비장T림파세포화B림파세포,병응용Western blot방법검측Blimp-1목적단백.결과표명,2충전기인순합자소서균유번식능력,기자대상호번식후제2대소서분리비례기본부합맹덕이유전규률,역가이성공획득교다적prdm1기인고제소서.결론:응용Cre-loxp계통가이성공지획득prdm1기인고제적소서.