中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2002年
11期
780-783
,共4页
沈坤堂%秦新裕%张新%程志红%许相儒%韩泽广
瀋坤堂%秦新裕%張新%程誌紅%許相儒%韓澤廣
침곤당%진신유%장신%정지홍%허상유%한택엄
人胰岛素原基因%基因表达调控%糖尿病,胰岛素依赖型%基因治疗
人胰島素原基因%基因錶達調控%糖尿病,胰島素依賴型%基因治療
인이도소원기인%기인표체조공%당뇨병,이도소의뢰형%기인치료
目的应用四环素(Tet)可调控性表达系统,建立条件控制性人工β细胞株,定量调节胰岛素基因在tet293细胞中的表达.方法构建含四环素反应元件和表达胰岛素原基因的重组载体pTRE2mINS.再将此载体与具有潮霉素抗性的质粒pTK-Hyg共转染能稳定表达反义四环素激活因子的细胞株tet293,然后用潮霉素筛选表达胰岛素的细胞株,通过四环素的衍生物强力霉素(Dox)调节胰岛素在此细胞株中的表达.采用Northern印迹、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫分析法,从mRNA和蛋白水平观察细胞培养基中强力霉素浓度的变化对胰岛素基因表达的影响.结果从28个单克隆细胞株中筛选1株能自主分泌一定量的胰岛素,又能受强力霉素调控分泌的细胞株.当细胞培养液中加入或不加强力霉素时,培养基中胰岛素的表达量分别为每24 h 241.0 U/1.0×106细胞和每24 h 9.7 U/1.0×106细胞,加强力霉素组是不加强力霉素组的25倍.而且随着强力霉素浓度的增加,tet293细胞内外胰岛素的表达水平逐步增高.结论人胰岛素基因在tet293细胞中的成功转移和高效表达,受四环素及其衍生物定时、定量调节,从而提高糖尿病基因治疗的精确性,安全性和有效性.
目的應用四環素(Tet)可調控性錶達繫統,建立條件控製性人工β細胞株,定量調節胰島素基因在tet293細胞中的錶達.方法構建含四環素反應元件和錶達胰島素原基因的重組載體pTRE2mINS.再將此載體與具有潮黴素抗性的質粒pTK-Hyg共轉染能穩定錶達反義四環素激活因子的細胞株tet293,然後用潮黴素篩選錶達胰島素的細胞株,通過四環素的衍生物彊力黴素(Dox)調節胰島素在此細胞株中的錶達.採用Northern印跡、逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和放射免疫分析法,從mRNA和蛋白水平觀察細胞培養基中彊力黴素濃度的變化對胰島素基因錶達的影響.結果從28箇單剋隆細胞株中篩選1株能自主分泌一定量的胰島素,又能受彊力黴素調控分泌的細胞株.噹細胞培養液中加入或不加彊力黴素時,培養基中胰島素的錶達量分彆為每24 h 241.0 U/1.0×106細胞和每24 h 9.7 U/1.0×106細胞,加彊力黴素組是不加彊力黴素組的25倍.而且隨著彊力黴素濃度的增加,tet293細胞內外胰島素的錶達水平逐步增高.結論人胰島素基因在tet293細胞中的成功轉移和高效錶達,受四環素及其衍生物定時、定量調節,從而提高糖尿病基因治療的精確性,安全性和有效性.
목적응용사배소(Tet)가조공성표체계통,건립조건공제성인공β세포주,정량조절이도소기인재tet293세포중적표체.방법구건함사배소반응원건화표체이도소원기인적중조재체pTRE2mINS.재장차재체여구유조매소항성적질립pTK-Hyg공전염능은정표체반의사배소격활인자적세포주tet293,연후용조매소사선표체이도소적세포주,통과사배소적연생물강력매소(Dox)조절이도소재차세포주중적표체.채용Northern인적、역전록-취합매련반응(RT-PCR)화방사면역분석법,종mRNA화단백수평관찰세포배양기중강력매소농도적변화대이도소기인표체적영향.결과종28개단극륭세포주중사선1주능자주분비일정량적이도소,우능수강력매소조공분비적세포주.당세포배양액중가입혹불가강력매소시,배양기중이도소적표체량분별위매24 h 241.0 U/1.0×106세포화매24 h 9.7 U/1.0×106세포,가강력매소조시불가강력매소조적25배.이차수착강력매소농도적증가,tet293세포내외이도소적표체수평축보증고.결론인이도소기인재tet293세포중적성공전이화고효표체,수사배소급기연생물정시、정량조절,종이제고당뇨병기인치료적정학성,안전성화유효성.
