中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2006年
3期
86-89
,共4页
金丰良%许小霞%赵士炜%古德祥%张文庆
金豐良%許小霞%趙士煒%古德祥%張文慶
금봉량%허소하%조사위%고덕상%장문경
家蝇%防御素%毕赤酵母%诱导表达%活性测定
傢蠅%防禦素%畢赤酵母%誘導錶達%活性測定
가승%방어소%필적효모%유도표체%활성측정
提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pastoris)受体菌GS115.经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中.在含不同浓度的Zeocin平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性.
提取傢蠅總RNA,RT-PCR擴增編碼傢蠅防禦素defensin的cDNA,剋隆併測定瞭其序列,將該cDNA序列與酵母錶達載體pPICZαA重組,構建酵母分泌型錶達載體pPICZα-de,電激法轉化畢赤酵母(Pichia pastoris)受體菌GS115.經錶型篩選和PCR鑒定證明目的片段已穩定整閤到酵母染色體基因組中.在含不同濃度的Zeocin平闆上篩選到高拷貝整閤的轉化子,暘性剋隆經甲醇誘導錶達,用Tricine-SDS-PAGE確定瞭錶達產物的正確性,瓊脂孔穴平闆擴散法、比濁法測定瞭錶達產物的活性,對金黃色葡萄毬菌Staphylococcus aureus具有一定的殺菌活性.
제취가승총RNA,RT-PCR확증편마가승방어소defensin적cDNA,극륭병측정료기서렬,장해cDNA서렬여효모표체재체pPICZαA중조,구건효모분비형표체재체pPICZα-de,전격법전화필적효모(Pichia pastoris)수체균GS115.경표형사선화PCR감정증명목적편단이은정정합도효모염색체기인조중.재함불동농도적Zeocin평판상사선도고고패정합적전화자,양성극륭경갑순유도표체,용Tricine-SDS-PAGE학정료표체산물적정학성,경지공혈평판확산법、비탁법측정료표체산물적활성,대금황색포도구균Staphylococcus aureus구유일정적살균활성.
