高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2007年
3期
301-306
,共6页
α-1%3-半乳糖基转移酶基因%基因打靶%人白细胞抗原HLA-G1
α-1%3-半乳糖基轉移酶基因%基因打靶%人白細胞抗原HLA-G1
α-1%3-반유당기전이매기인%기인타파%인백세포항원HLA-G1
构建了敲除猪α-1,3-GT并敲入人白细胞抗原HLA-G1基因的打靶载体pZJ,其中以新霉素抗性基因(Neo)为正筛选基因,绿色荧光蛋白基因(GFP)为负筛选基因.采用优化的脂质体转染法将打靶载体pZJ转染于一个长势良好的胎猪成纤维细胞系中,经7天G418(600 μg/ml)药物筛选,共获得30个Neo抗性细胞克隆,其中12个为非绿色荧光细胞克隆,7个扩大培养良好,提取阳性克隆细胞的基因组DNA并进行PCR检测.经PCR结果检测,打靶载体转入到胎猪成纤维细胞中,其中3个非荧光阳性单克隆细胞在细胞基因组中进行了定点整合.以同样的脂质体转染条件将pZJ转染牛胎儿成纤维细胞,经筛选并对其进行PCR检测,其中2个均为定点整合阳性.该研究为今后克隆出表达HLA-G1而不表达α-1,3-GT基因的个体猪,从而提供可以真正用于临床的异种器官打下了基础,也为猪牛之间的跨物种敲除提供了一个佐证.
構建瞭敲除豬α-1,3-GT併敲入人白細胞抗原HLA-G1基因的打靶載體pZJ,其中以新黴素抗性基因(Neo)為正篩選基因,綠色熒光蛋白基因(GFP)為負篩選基因.採用優化的脂質體轉染法將打靶載體pZJ轉染于一箇長勢良好的胎豬成纖維細胞繫中,經7天G418(600 μg/ml)藥物篩選,共穫得30箇Neo抗性細胞剋隆,其中12箇為非綠色熒光細胞剋隆,7箇擴大培養良好,提取暘性剋隆細胞的基因組DNA併進行PCR檢測.經PCR結果檢測,打靶載體轉入到胎豬成纖維細胞中,其中3箇非熒光暘性單剋隆細胞在細胞基因組中進行瞭定點整閤.以同樣的脂質體轉染條件將pZJ轉染牛胎兒成纖維細胞,經篩選併對其進行PCR檢測,其中2箇均為定點整閤暘性.該研究為今後剋隆齣錶達HLA-G1而不錶達α-1,3-GT基因的箇體豬,從而提供可以真正用于臨床的異種器官打下瞭基礎,也為豬牛之間的跨物種敲除提供瞭一箇佐證.
구건료고제저α-1,3-GT병고입인백세포항원HLA-G1기인적타파재체pZJ,기중이신매소항성기인(Neo)위정사선기인,록색형광단백기인(GFP)위부사선기인.채용우화적지질체전염법장타파재체pZJ전염우일개장세량호적태저성섬유세포계중,경7천G418(600 μg/ml)약물사선,공획득30개Neo항성세포극륭,기중12개위비록색형광세포극륭,7개확대배양량호,제취양성극륭세포적기인조DNA병진행PCR검측.경PCR결과검측,타파재체전입도태저성섬유세포중,기중3개비형광양성단극륭세포재세포기인조중진행료정점정합.이동양적지질체전염조건장pZJ전염우태인성섬유세포,경사선병대기진행PCR검측,기중2개균위정점정합양성.해연구위금후극륭출표체HLA-G1이불표체α-1,3-GT기인적개체저,종이제공가이진정용우림상적이충기관타하료기출,야위저우지간적과물충고제제공료일개좌증.
