CAJ | 학술논문

目的:骨髓间充质干细胞是存在于骨髓组织中多种干细胞的混和体,因其具有取材方便、扩增迅速、可自体移植并且具有多分化潜能等特点,是近年研究的热点.实验建立了体外分离、培养及鉴定兔骨髓间充质干细胞的方法,并通过此进一步验证其诱导成骨及成脂多向分化的潜能.方法: 实验于2006-08/2007-06在吉林大学药学院生物工程实验室完成, 实验室属吉林大学重点实验室.①实验材料:四五月龄新西兰大白兔2只, 由吉林大学基础医学院动物培养中心提供, 体质量1.0～1.5 kg, 雌雄不限, 实验动物级别为二级, 实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:实验应用了密度梯度离心法与贴壁培养法相结合的方法从兔股骨、胫骨中分离、纯化骨髓间充质干细胞并在体外进行培养,以形态学及细胞表面标志的方法鉴定间充质干细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态特征,并利用成骨诱导剂包括0.1 μmol/L的地塞米松、50 mg/L的维生素C、10 mmol/Lβ-磷酸甘油钠和成脂诱导剂含10%FBS的L-DMEM、0.25 μmol/L地塞米松、50 μmol/L吲哚美辛、0.5 mmol/L IBMX、10 mg/L牛胰岛素诱导其向软骨细胞及脂肪细胞分化.结果:①经原代及传代培养的骨髓间充质干细胞呈梭形,类似于成纤维细胞,骨髓间充质干细胞均一地表达CD29、CD44,而CD34、CD45均阴性表达.②成骨诱导14 d后细胞不明显,未形成钙结节,21 d后碱性磷酸酶钙钴法染色后大多数细胞的胞质呈棕黑色.③成脂诱导48 h后,细胞内有小脂滴出现,2周后脂滴数量增加并相互融合,细胞(有)由长梭形变为圆形或多边形,油红O染色显示有大量脂质沉积.结论:密度梯度离心法与贴壁培养法相结合的方法是比较理想的骨髓间充质干细胞培养法,骨髓间充质干细胞经诱导培养后具有多向分化潜能.
목적:골수간충질간세포시존재우골수조직중다충간세포적혼화체,인기구유취재방편、확증신속、가자체이식병차구유다분화잠능등특점,시근년연구적열점.실험건립료체외분리、배양급감정토골수간충질간세포적방법,병통과차진일보험증기유도성골급성지다향분화적잠능.방법: 실험우2006-08/2007-06재길림대학약학원생물공정실험실완성, 실험실속길림대학중점실험실.①실험재료:사오월령신서란대백토2지, 유길림대학기출의학원동물배양중심제공, 체질량1.0～1.5 kg, 자웅불한, 실험동물급별위이급, 실험과정중대동물처치부합동물윤리학표준.②실험방법:실험응용료밀도제도리심법여첩벽배양법상결합적방법종토고골、경골중분리、순화골수간충질간세포병재체외진행배양,이형태학급세포표면표지적방법감정간충질간세포,재도치현미경하관찰세포적형태특정,병이용성골유도제포괄0.1 μmol/L적지새미송、50 mg/L적유생소C、10 mmol/Lβ-린산감유납화성지유도제함10%FBS적L-DMEM、0.25 μmol/L지새미송、50 μmol/L신타미신、0.5 mmol/L IBMX、10 mg/L우이도소유도기향연골세포급지방세포분화.결과:①경원대급전대배양적골수간충질간세포정사형,유사우성섬유세포,골수간충질간세포균일지표체CD29、CD44,이CD34、CD45균음성표체.②성골유도14 d후세포불명현,미형성개결절,21 d후감성린산매개고법염색후대다수세포적포질정종흑색.③성지유도48 h후,세포내유소지적출현,2주후지적수량증가병상호융합,세포(유)유장사형변위원형혹다변형,유홍O염색현시유대량지질침적.결론:밀도제도리심법여첩벽배양법상결합적방법시비교이상적골수간충질간세포배양법,골수간충질간세포경유도배양후구유다향분화잠능.