现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2008年
5期
817-819
,共3页
张福强%王斗斗%宿晓云%马杰
張福彊%王鬥鬥%宿曉雲%馬傑
장복강%왕두두%숙효운%마걸
通用载体%CDR3%筛选%表达%功能性抗体
通用載體%CDR3%篩選%錶達%功能性抗體
통용재체%CDR3%사선%표체%공능성항체
目的:构建一个可供抗体CDR(决定簇互补区)进行自由替换、筛选、表达的通用载体,并对其生物学功能进行鉴定.方法:在已构建好的具有Fc段的完全人源抗狂犬病病毒抗体表达栽体基础上,利用PCR介导的定点突变技术,引入2个可供CDR3区进行自由替换的限制性酶切位点,构建出通用表达载体.体外合成人源、鼠源抗乳腺癌Her2抗体的CDR3区,克隆至已构建的通用载体,在毕赤酵母中诱导表达.应用ELISA和Western Blotting技术对亲本抗体和新抗体进行生物学及免疫学分析.结果:PCR、Western Blotting等试验表明具有Her2抗原结合活性的人源和鼠源突变型抗体获得成功表达,通过对表达产物的免疫学及功能学检测证明所表达出的抗体具有抗原中和活性,而且鼠源抗体的活性要稍高于人源抗体.结论:成功构建了可用于功能性抗体筛选和表达的通用载体,对抗体的体外亲和力成熟及抗体的人源化有重要意义.
目的:構建一箇可供抗體CDR(決定簇互補區)進行自由替換、篩選、錶達的通用載體,併對其生物學功能進行鑒定.方法:在已構建好的具有Fc段的完全人源抗狂犬病病毒抗體錶達栽體基礎上,利用PCR介導的定點突變技術,引入2箇可供CDR3區進行自由替換的限製性酶切位點,構建齣通用錶達載體.體外閤成人源、鼠源抗乳腺癌Her2抗體的CDR3區,剋隆至已構建的通用載體,在畢赤酵母中誘導錶達.應用ELISA和Western Blotting技術對親本抗體和新抗體進行生物學及免疫學分析.結果:PCR、Western Blotting等試驗錶明具有Her2抗原結閤活性的人源和鼠源突變型抗體穫得成功錶達,通過對錶達產物的免疫學及功能學檢測證明所錶達齣的抗體具有抗原中和活性,而且鼠源抗體的活性要稍高于人源抗體.結論:成功構建瞭可用于功能性抗體篩選和錶達的通用載體,對抗體的體外親和力成熟及抗體的人源化有重要意義.
목적:구건일개가공항체CDR(결정족호보구)진행자유체환、사선、표체적통용재체,병대기생물학공능진행감정.방법:재이구건호적구유Fc단적완전인원항광견병병독항체표체재체기출상,이용PCR개도적정점돌변기술,인입2개가공CDR3구진행자유체환적한제성매절위점,구건출통용표체재체.체외합성인원、서원항유선암Her2항체적CDR3구,극륭지이구건적통용재체,재필적효모중유도표체.응용ELISA화Western Blotting기술대친본항체화신항체진행생물학급면역학분석.결과:PCR、Western Blotting등시험표명구유Her2항원결합활성적인원화서원돌변형항체획득성공표체,통과대표체산물적면역학급공능학검측증명소표체출적항체구유항원중화활성,이차서원항체적활성요초고우인원항체.결론:성공구건료가용우공능성항체사선화표체적통용재체,대항체적체외친화력성숙급항체적인원화유중요의의.
