CAJ | 학술논문

将重组质粒pET28a-VP2转化禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40,探讨该转化菌表达的VP2是否具有免疫原性,以及重组表达质粒在转化菌内的稳定性.该转化菌在体外经IPTG或乳糖诱导,表达产物经AGP检测,VP2滴度可达1/4;经间接ELISA检测,VP2滴度可达1/512;经SDS-PAGE分析,出现VP2蛋白条带.结果表明,诱导表达的提取液中有一定量可溶性VP2.将pET28a-VP2转化的禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40经诱导后,接种爱维菌肉仔鸡,21日龄及35日龄时,分别肌肉注射菌液0.1、0.2 ml/只(3×108个/ml活菌).49日龄时,感染IBDV标准强毒株BC6/85.IBDVVP2血清抗体检测结果,不接种组(B)、0.1 ml接种组(C)、0.2 ml接种组(D)及空质粒转化菌接种组(E)的AGP抗体检测阳性率分别为0、65%、70%、0;间接ELISA抗体检测阳性率分别为0、80%、85%、0;IBDV强毒感染的免疫保护率分别为5%、75%、75%、5%.经t检验.B组与C组、B组与D组、E组与C组、E组与D组,P＜0.05,差异均显著,但B组与E组、C组与D组,P＞0.05,差异均不显著.免疫试验结果表明,诱导表达产物VP2可有效地刺激鸡体产生体液免疫应答,刺激鸡体建立的免疫力可以抵抗一定剂量强毒的攻击.在质粒稳定性测定中,第9代次及以后的3个代次,20个菌落的VP2目的基因PCR检测结果均为阴性,表明该质粒在禽多杀性巴氏杆菌弱毒株C190E40内是不稳定的.
장중조질립pET28a-VP2전화금다살성파씨간균약독주G190E40,탐토해전화균표체적VP2시부구유면역원성,이급중조표체질립재전화균내적은정성.해전화균재체외경IPTG혹유당유도,표체산물경AGP검측,VP2적도가체1/4;경간접ELISA검측,VP2적도가체1/512;경SDS-PAGE분석,출현VP2단백조대.결과표명,유도표체적제취액중유일정량가용성VP2.장pET28a-VP2전화적금다살성파씨간균약독주G190E40경유도후,접충애유균육자계,21일령급35일령시,분별기육주사균액0.1、0.2 ml/지(3×108개/ml활균).49일령시,감염IBDV표준강독주BC6/85.IBDVVP2혈청항체검측결과,불접충조(B)、0.1 ml접충조(C)、0.2 ml접충조(D)급공질립전화균접충조(E)적AGP항체검측양성솔분별위0、65%、70%、0;간접ELISA항체검측양성솔분별위0、80%、85%、0;IBDV강독감염적면역보호솔분별위5%、75%、75%、5%.경t검험.B조여C조、B조여D조、E조여C조、E조여D조,P＜0.05,차이균현저,단B조여E조、C조여D조,P＞0.05,차이균불현저.면역시험결과표명,유도표체산물VP2가유효지자격계체산생체액면역응답,자격계체건립적면역력가이저항일정제량강독적공격.재질립은정성측정중,제9대차급이후적3개대차,20개균락적VP2목적기인PCR검측결과균위음성,표명해질립재금다살성파씨간균약독주C190E40내시불은정적.