临床心血管病杂志
臨床心血管病雜誌
림상심혈관병잡지
JOURNAL OF CLINICAL CARDIOLOGY
2008年
12期
939-943
,共5页
叶顺传%曾秋棠%吴辉文%吕云波
葉順傳%曾鞦棠%吳輝文%呂雲波
협순전%증추당%오휘문%려운파
肿瘤坏死因子受体1%肌球蛋白Ⅱ重链B%小分子干扰RNA%人脐静脉血管内皮细胞%转位
腫瘤壞死因子受體1%肌毬蛋白Ⅱ重鏈B%小分子榦擾RNA%人臍靜脈血管內皮細胞%轉位
종류배사인자수체1%기구단백Ⅱ중련B%소분자간우RNA%인제정맥혈관내피세포%전위
目的:观察非肌肉肌球蛋白重链Ⅲ B(nonmuscle myosin heavy chain ⅡB,NMHC-ⅡB)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肿瘤坏死因子受体1(TNF receptor 1,TNFR 1)转位的影响.方法:将成功构建的重组pEGFP-N1/TNFR 1载体通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染人HUVECs,筛选获得稳定克隆株.设计并合成NMHC-ⅡB的小分子干扰RNA(small interference RNA,siRNA),用脂质体LipofectamineTM2000转染进入该稳定克隆株,差速离心加蔗糖密度梯度离心收获细胞质膜,Western印迹法观察TNFa诱导前和诱导后细胞质膜上TNFR 1蛋白含量的变化.结果:与空白对照组比较,转染NMHC-ⅡB siRNA组进入HUVECs,可以明显抑制细胞内NMHC-ⅡB mRNA的表达[(0.670 4±0.024 2):(0.454 0±0.041 1),P＜0.01],也可以明显减少TNFa诱导前[(0.430 6±0.028 9):(0.324 8±0.016 7),P＜0.01]和诱导后[(0.660 9±0.026 5):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01]细胞质膜TNFR 1的含量.在转染NMHC-ⅡB siRNA的细胞,TNFa的诱导仍然可以提高细胞质膜TNFR 1的含量,诱导前、后比较[(0.324 8±0.016 7):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01].结论:NMHC-ⅡB可能在TNFR 1从反式高尔基体到细胞质膜的转位或运输中起正向作用.但是可能并不是惟一的或决定性的因素.
目的:觀察非肌肉肌毬蛋白重鏈Ⅲ B(nonmuscle myosin heavy chain ⅡB,NMHC-ⅡB)對人臍靜脈血管內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中腫瘤壞死因子受體1(TNF receptor 1,TNFR 1)轉位的影響.方法:將成功構建的重組pEGFP-N1/TNFR 1載體通過暘離子脂質體Lipofectin介導的方法轉染人HUVECs,篩選穫得穩定剋隆株.設計併閤成NMHC-ⅡB的小分子榦擾RNA(small interference RNA,siRNA),用脂質體LipofectamineTM2000轉染進入該穩定剋隆株,差速離心加蔗糖密度梯度離心收穫細胞質膜,Western印跡法觀察TNFa誘導前和誘導後細胞質膜上TNFR 1蛋白含量的變化.結果:與空白對照組比較,轉染NMHC-ⅡB siRNA組進入HUVECs,可以明顯抑製細胞內NMHC-ⅡB mRNA的錶達[(0.670 4±0.024 2):(0.454 0±0.041 1),P＜0.01],也可以明顯減少TNFa誘導前[(0.430 6±0.028 9):(0.324 8±0.016 7),P＜0.01]和誘導後[(0.660 9±0.026 5):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01]細胞質膜TNFR 1的含量.在轉染NMHC-ⅡB siRNA的細胞,TNFa的誘導仍然可以提高細胞質膜TNFR 1的含量,誘導前、後比較[(0.324 8±0.016 7):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01].結論:NMHC-ⅡB可能在TNFR 1從反式高爾基體到細胞質膜的轉位或運輸中起正嚮作用.但是可能併不是惟一的或決定性的因素.
목적:관찰비기육기구단백중련Ⅲ B(nonmuscle myosin heavy chain ⅡB,NMHC-ⅡB)대인제정맥혈관내피세포(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)중종류배사인자수체1(TNF receptor 1,TNFR 1)전위적영향.방법:장성공구건적중조pEGFP-N1/TNFR 1재체통과양리자지질체Lipofectin개도적방법전염인HUVECs,사선획득은정극륭주.설계병합성NMHC-ⅡB적소분자간우RNA(small interference RNA,siRNA),용지질체LipofectamineTM2000전염진입해은정극륭주,차속리심가자당밀도제도리심수획세포질막,Western인적법관찰TNFa유도전화유도후세포질막상TNFR 1단백함량적변화.결과:여공백대조조비교,전염NMHC-ⅡB siRNA조진입HUVECs,가이명현억제세포내NMHC-ⅡB mRNA적표체[(0.670 4±0.024 2):(0.454 0±0.041 1),P＜0.01],야가이명현감소TNFa유도전[(0.430 6±0.028 9):(0.324 8±0.016 7),P＜0.01]화유도후[(0.660 9±0.026 5):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01]세포질막TNFR 1적함량.재전염NMHC-ⅡB siRNA적세포,TNFa적유도잉연가이제고세포질막TNFR 1적함량,유도전、후비교[(0.324 8±0.016 7):(0.492 2±0.021 7),P＜0.01].결론:NMHC-ⅡB가능재TNFR 1종반식고이기체도세포질막적전위혹운수중기정향작용.단시가능병불시유일적혹결정성적인소.
