畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
4期
538-543
,共6页
周毅%吴玉石%段宏安%张睿%周祖涛%毕丁仁%石德时
週毅%吳玉石%段宏安%張睿%週祖濤%畢丁仁%石德時
주의%오옥석%단굉안%장예%주조도%필정인%석덕시
牛白血病病毒%gp51蛋白%原核表达%间接ELISA
牛白血病病毒%gp51蛋白%原覈錶達%間接ELISA
우백혈병병독%gp51단백%원핵표체%간접ELISA
从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp.将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性.以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法.结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg·mL-1,血清的最佳稀释倍数为1:80,阳性判定标准确定为样品OD450nm大于0.451.用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%.
從持續感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎腎細胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法擴增編碼牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列測定結果錶明擴增片段全長828 bp.將擴增基因插入原覈錶達載體pET-32a構建pET-32a-gp51重組質粒,轉化BL21(DE3)進行誘導錶達,SDS-PAGE電泳結果錶明重組融閤蛋白大小約為43 000,Western-blot結果錶明重組錶達蛋白具有免疫反應性.以純化的重組蛋白gp51作為抗原,建立檢測BLV抗體的間接ELISA診斷方法.結果錶明,抗原gp51的最佳包被濃度為2.19μg·mL-1,血清的最佳稀釋倍數為1:80,暘性判定標準確定為樣品OD450nm大于0.451.用該方法對12份參攷血清進行檢測,準確率為91.67%.
종지속감염우백혈병병독(BLV)적양태신세포(FLK-BLV)중제취전병독DNA,용PCR방법확증편마우백혈병병독gp51단백적env(gp51)기인,서렬측정결과표명확증편단전장828 bp.장확증기인삽입원핵표체재체pET-32a구건pET-32a-gp51중조질립,전화BL21(DE3)진행유도표체,SDS-PAGE전영결과표명중조융합단백대소약위43 000,Western-blot결과표명중조표체단백구유면역반응성.이순화적중조단백gp51작위항원,건립검측BLV항체적간접ELISA진단방법.결과표명,항원gp51적최가포피농도위2.19μg·mL-1,혈청적최가희석배수위1:80,양성판정표준학정위양품OD450nm대우0.451.용해방법대12빈삼고혈청진행검측,준학솔위91.67%.
