CAJ | 학술논문

本研究通过Transwell细胞隔离培养体系探讨骨髓源间充质干细胞(MSC)对脐血(CB)来源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)/自然杀伤细胞(NK)CD69的表达以及对培养体系中CD4+CD25+ T调节(T reg)细胞量比的影响.利用聚碳酯膜孔径0.4 μm的Transwell隔离细胞培养系统将实验组分为隔离培养(Transwell)组和直接混合(mix-ture)培养组;将MSC和CIK/NK细胞按1:20、1:50和1:100的比例分别在Transwell组和mixture组中进行隔离和直接混合培养,每组6个重复孔;培养48小时后通过流式细胞术检测各组CIK/NK细胞上CD69的表达以及培养体系中CD4+ CD25+ 细胞量比的变化.结果显示:加入MSC的实验各组CB-CIK细胞和NK细胞上表达的CD69比例均显著低于对照组(P值均<0.001).Transwell组中的CIK和NK细胞上表达的CD69,在MSC的高浓度组(1:20组)均显著低于低浓度组(1:50组和1:100组),其中CIK细胞组间的P值分别为0.046、0.020;NK细胞组间的P值均为0.000.mixture组中不同比例组间CIK细胞上表达的CD69无显著性差异,而NK细胞上CD69的表达在MSC的高浓度组(1:20组)均显著低于低浓度组(1:50组和1:100组).加入MSC的CB-CIK/NK细胞体系中的CD4+CD25+细胞的量比不论在Transwell还是mixture组中均显著高于对照组(P值均<0.01);在Transwell组中,CIK/NK细胞体系中的CD4+ CD256+ 细胞的量比在1:20组、1:50组均显著高于1:100组;在mixture各组中,CIK/NK细胞体系中的CD4+ CD25+ T调节细胞的量比均有显著性差异.MsC的高浓度组(1:20组),CIK/NK细胞体系中的CIM+ CD25+ 细胞量比在mixture组显著高于Tranawell组;而在MSC的低浓度组(1:50组和1:100组),2组体系中的CD4+ CD25+ 细胞量比无显著性差异.结论:MSC能以直接接触或间接作用的方式抑制异基因CIK/NK细胞的活化,这可能与MSC能上调培养体系中的CD4+ CD25+ T reg细胞量比有关,且这种作用与MSC的数量呈浓度依赖关系.
본연구통과Transwell세포격리배양체계탐토골수원간충질간세포(MSC)대제혈(CB)래원세포인자유도살상세포(CIK)/자연살상세포(NK)CD69적표체이급대배양체계중CD4+CD25+ T조절(T reg)세포량비적영향.이용취탄지막공경0.4 μm적Transwell격리세포배양계통장실험조분위격리배양(Transwell)조화직접혼합(mix-ture)배양조;장MSC화CIK/NK세포안1:20、1:50화1:100적비례분별재Transwell조화mixture조중진행격리화직접혼합배양,매조6개중복공;배양48소시후통과류식세포술검측각조CIK/NK세포상CD69적표체이급배양체계중CD4+ CD25+ 세포량비적변화.결과현시:가입MSC적실험각조CB-CIK세포화NK세포상표체적CD69비례균현저저우대조조(P치균<0.001).Transwell조중적CIK화NK세포상표체적CD69,재MSC적고농도조(1:20조)균현저저우저농도조(1:50조화1:100조),기중CIK세포조간적P치분별위0.046、0.020;NK세포조간적P치균위0.000.mixture조중불동비례조간CIK세포상표체적CD69무현저성차이,이NK세포상CD69적표체재MSC적고농도조(1:20조)균현저저우저농도조(1:50조화1:100조).가입MSC적CB-CIK/NK세포체계중적CD4+CD25+세포적량비불론재Transwell환시mixture조중균현저고우대조조(P치균<0.01);재Transwell조중,CIK/NK세포체계중적CD4+ CD256+ 세포적량비재1:20조、1:50조균현저고우1:100조;재mixture각조중,CIK/NK세포체계중적CD4+ CD25+ T조절세포적량비균유현저성차이.MsC적고농도조(1:20조),CIK/NK세포체계중적CIM+ CD25+ 세포량비재mixture조현저고우Tranawell조;이재MSC적저농도조(1:50조화1:100조),2조체계중적CD4+ CD25+ 세포량비무현저성차이.결론:MSC능이직접접촉혹간접작용적방식억제이기인CIK/NK세포적활화,저가능여MSC능상조배양체계중적CD4+ CD25+ T reg세포량비유관,차저충작용여MSC적수량정농도의뢰관계.