实用肝脏病杂志
實用肝髒病雜誌
실용간장병잡지
JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2010年
3期
161-165
,共5页
胡斌%杨燕%刘嘉%马智勇%黄红平%余源%刘慎沛%杨东亮
鬍斌%楊燕%劉嘉%馬智勇%黃紅平%餘源%劉慎沛%楊東亮
호빈%양연%류가%마지용%황홍평%여원%류신패%양동량
HepG2.215细胞%腺相关病毒2%RNA干扰%HBsAg
HepG2.215細胞%腺相關病毒2%RNA榦擾%HBsAg
HepG2.215세포%선상관병독2%RNA간우%HBsAg
目的 构建表达针对HBsAg小发卡RNA(shRNA)的重组腺相关病毒载体,以观察该病毒在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用.方法 将表达针对HBsAg的shRNA定向克隆到pAAV/U6-hrGFP质粒中,获得重组表达质粒(pAAV-shHBs-hrGFP);采用磷酸钙转染法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染AAV 293细胞,进行rAAV-shHBs-hrGFP重组病毒包装.收获病毒感染HepG2.215细胞;采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平.结果 酶切鉴定、测序结果表明,pAAV-shHBs-hrGFP载体成功构建.包装收获的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215细胞,并且可以抑制HBsAg和HBeAg的表达.结论 制备的rAAV-shHBs-hrGFP病毒载体能够抑制HBV在体外的抗原表达.
目的 構建錶達針對HBsAg小髮卡RNA(shRNA)的重組腺相關病毒載體,以觀察該病毒在體外對HBsAg和HBeAg的抑製作用.方法 將錶達針對HBsAg的shRNA定嚮剋隆到pAAV/U6-hrGFP質粒中,穫得重組錶達質粒(pAAV-shHBs-hrGFP);採用燐痠鈣轉染法將該質粒與包裝質粒pAAV-RC和輔助質粒pHelper共同轉染AAV 293細胞,進行rAAV-shHBs-hrGFP重組病毒包裝.收穫病毒感染HepG2.215細胞;採用ELISA法檢測HBsAg和HBeAg水平.結果 酶切鑒定、測序結果錶明,pAAV-shHBs-hrGFP載體成功構建.包裝收穫的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215細胞,併且可以抑製HBsAg和HBeAg的錶達.結論 製備的rAAV-shHBs-hrGFP病毒載體能夠抑製HBV在體外的抗原錶達.
목적 구건표체침대HBsAg소발잡RNA(shRNA)적중조선상관병독재체,이관찰해병독재체외대HBsAg화HBeAg적억제작용.방법 장표체침대HBsAg적shRNA정향극륭도pAAV/U6-hrGFP질립중,획득중조표체질립(pAAV-shHBs-hrGFP);채용린산개전염법장해질립여포장질립pAAV-RC화보조질립pHelper공동전염AAV 293세포,진행rAAV-shHBs-hrGFP중조병독포장.수획병독감염HepG2.215세포;채용ELISA법검측HBsAg화HBeAg수평.결과 매절감정、측서결과표명,pAAV-shHBs-hrGFP재체성공구건.포장수획적rAAV-shHBs-hrGFP병독액가이감염HepG2.215세포,병차가이억제HBsAg화HBeAg적표체.결론 제비적rAAV-shHBs-hrGFP병독재체능구억제HBV재체외적항원표체.
