中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2010年
6期
1600-1603
,共4页
陈种%张焕新%曾令宇%张滢%张建军%徐开林
陳種%張煥新%曾令宇%張瀅%張建軍%徐開林
진충%장환신%증령우%장형%장건군%서개림
慢病毒载体%RORγt%293FT细胞
慢病毒載體%RORγt%293FT細胞
만병독재체%RORγt%293FT세포
本研究构建携带小鼠ROFγt和glp基因的重组慢病毒栽体,检测RORγt蛋白在293FT细胞中的表达.用RT-PCR扩增小鼠RORγt基因,将其克隆至PCR2.1 T栽体,酶切制备RORγt DNA片段,插入MigRl质粒后将RORγt-IRES-GFP定向连入慢病毒转移质粒pTK208,生成pXZ9-RORγt.用脂质体介导三质粒共转染法转染293FT细胞,荧光显微镜下观察GFP表达情况,以Western blot鉴定RORγt的表达.结果表明,RT-PCR扩增出RORγt基因并克隆入PCR2.1 T载体;经亚克隆构建了慢病毒转移质粒XZ9-RORγt.质粒经脂质体转染293FT细胞获慢病毒颗粒,慢病毒颗粒体外高效感染293FT细胞,感染后Western b1ot检测到RORγt蛋白表达.结论:成功构建慢病毒载体pXZ9-RORγt,并在293细胞内获得表达.
本研究構建攜帶小鼠ROFγt和glp基因的重組慢病毒栽體,檢測RORγt蛋白在293FT細胞中的錶達.用RT-PCR擴增小鼠RORγt基因,將其剋隆至PCR2.1 T栽體,酶切製備RORγt DNA片段,插入MigRl質粒後將RORγt-IRES-GFP定嚮連入慢病毒轉移質粒pTK208,生成pXZ9-RORγt.用脂質體介導三質粒共轉染法轉染293FT細胞,熒光顯微鏡下觀察GFP錶達情況,以Western blot鑒定RORγt的錶達.結果錶明,RT-PCR擴增齣RORγt基因併剋隆入PCR2.1 T載體;經亞剋隆構建瞭慢病毒轉移質粒XZ9-RORγt.質粒經脂質體轉染293FT細胞穫慢病毒顆粒,慢病毒顆粒體外高效感染293FT細胞,感染後Western b1ot檢測到RORγt蛋白錶達.結論:成功構建慢病毒載體pXZ9-RORγt,併在293細胞內穫得錶達.
본연구구건휴대소서ROFγt화glp기인적중조만병독재체,검측RORγt단백재293FT세포중적표체.용RT-PCR확증소서RORγt기인,장기극륭지PCR2.1 T재체,매절제비RORγt DNA편단,삽입MigRl질립후장RORγt-IRES-GFP정향련입만병독전이질립pTK208,생성pXZ9-RORγt.용지질체개도삼질립공전염법전염293FT세포,형광현미경하관찰GFP표체정황,이Western blot감정RORγt적표체.결과표명,RT-PCR확증출RORγt기인병극륭입PCR2.1 T재체;경아극륭구건료만병독전이질립XZ9-RORγt.질립경지질체전염293FT세포획만병독과립,만병독과립체외고효감염293FT세포,감염후Western b1ot검측도RORγt단백표체.결론:성공구건만병독재체pXZ9-RORγt,병재293세포내획득표체.
