生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
312-316
,共5页
张京云%张茜%章立娟%阚飙
張京雲%張茜%章立娟%闞飆
장경운%장천%장립연%감표
RNA聚合酶%启动子%噬菌体%霍乱弧菌
RNA聚閤酶%啟動子%噬菌體%霍亂弧菌
RNA취합매%계동자%서균체%곽란호균
目的:研究不同来源的RNA聚合酶对预测的霍乱弧菌分型噬菌体VP3启动子的作用.方法:以含有预测的VP3启动子区的片段取代质粒pRL-null的,T7启动子区,以海肾萤光素酶基因Rluc为报告基因,在霍乱弧菌N16961内检测霍乱弧菌RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用;将上述重组质粒和表达VP3 RNA聚合酶的质粒共转化大肠杆菌JM109,检测大肠杆菌和VP3的RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用.结果:N16961的RNA聚合酶不能识别并作用于启动子P1、P2、P5、P6、P10和P12,JM109的RNA聚合酶可能识别并作用于启动子P7和P11;只有P2、P7、P8、P9、P13、P16和P17在JM109内可以被克隆表达的VP3 RNA聚合酶识别转录.结论:宿主菌N16961与非宿主菌JM109的RNA聚合酶识别转录VP3启动子的能力不同,可能与噬菌体的宿主特异性有关;VP3的RNA聚合酶对大部分有活性的VP3启动子具有直接启动转录作用,但部分启动子可能需要VP3或宿主蛋白的辅助作用才能表现出更强的活性;VP3启动子对VP3 RNA聚合酶的特异性也不同,P1、P2和P12对VP3的RNA聚合酶具有高度特异性,P7和P11的特异性较弱.
目的:研究不同來源的RNA聚閤酶對預測的霍亂弧菌分型噬菌體VP3啟動子的作用.方法:以含有預測的VP3啟動子區的片段取代質粒pRL-null的,T7啟動子區,以海腎螢光素酶基因Rluc為報告基因,在霍亂弧菌N16961內檢測霍亂弧菌RNA聚閤酶對剋隆的啟動子區的作用;將上述重組質粒和錶達VP3 RNA聚閤酶的質粒共轉化大腸桿菌JM109,檢測大腸桿菌和VP3的RNA聚閤酶對剋隆的啟動子區的作用.結果:N16961的RNA聚閤酶不能識彆併作用于啟動子P1、P2、P5、P6、P10和P12,JM109的RNA聚閤酶可能識彆併作用于啟動子P7和P11;隻有P2、P7、P8、P9、P13、P16和P17在JM109內可以被剋隆錶達的VP3 RNA聚閤酶識彆轉錄.結論:宿主菌N16961與非宿主菌JM109的RNA聚閤酶識彆轉錄VP3啟動子的能力不同,可能與噬菌體的宿主特異性有關;VP3的RNA聚閤酶對大部分有活性的VP3啟動子具有直接啟動轉錄作用,但部分啟動子可能需要VP3或宿主蛋白的輔助作用纔能錶現齣更彊的活性;VP3啟動子對VP3 RNA聚閤酶的特異性也不同,P1、P2和P12對VP3的RNA聚閤酶具有高度特異性,P7和P11的特異性較弱.
목적:연구불동래원적RNA취합매대예측적곽란호균분형서균체VP3계동자적작용.방법:이함유예측적VP3계동자구적편단취대질립pRL-null적,T7계동자구,이해신형광소매기인Rluc위보고기인,재곽란호균N16961내검측곽란호균RNA취합매대극륭적계동자구적작용;장상술중조질립화표체VP3 RNA취합매적질립공전화대장간균JM109,검측대장간균화VP3적RNA취합매대극륭적계동자구적작용.결과:N16961적RNA취합매불능식별병작용우계동자P1、P2、P5、P6、P10화P12,JM109적RNA취합매가능식별병작용우계동자P7화P11;지유P2、P7、P8、P9、P13、P16화P17재JM109내가이피극륭표체적VP3 RNA취합매식별전록.결론:숙주균N16961여비숙주균JM109적RNA취합매식별전록VP3계동자적능력불동,가능여서균체적숙주특이성유관;VP3적RNA취합매대대부분유활성적VP3계동자구유직접계동전록작용,단부분계동자가능수요VP3혹숙주단백적보조작용재능표현출경강적활성;VP3계동자대VP3 RNA취합매적특이성야불동,P1、P2화P12대VP3적RNA취합매구유고도특이성,P7화P11적특이성교약.
