中国医师杂志
中國醫師雜誌
중국의사잡지
JOURNAL OF CHINESE PHYSICIAN
2005年
9期
1164-1166
,共3页
徐卓佳%戴勇%李体远%彭武建
徐卓佳%戴勇%李體遠%彭武建
서탁가%대용%리체원%팽무건
重组人促红细胞生成素%真核表达载体%基因扩增%序列分析
重組人促紅細胞生成素%真覈錶達載體%基因擴增%序列分析
중조인촉홍세포생성소%진핵표체재체%기인확증%서렬분석
目的构建并鉴定含有四环素调控的pTRE顺式作用元件的质粒型载体pTRE2hyg-rhEPO.方法设计含BamH I和Cla I酶切位点的hEPO基因引物,采用RT-PCR法从含有rhEPO基因的CHO细胞中克隆hEPO基因片段,亚克隆至pTRE2hyg真核表达载体.转化感受态大肠杆菌Top10,酶切鉴定阳性重组子,并进行序列测定.结果经RT-PCR能扩增出604bp的片段,与预期片段大小相符,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段,测序结果与预期序列完全一致.结论成功构建了重组人EPO四环素调控真核表达载体pTRE2hyg-rhEPO.
目的構建併鑒定含有四環素調控的pTRE順式作用元件的質粒型載體pTRE2hyg-rhEPO.方法設計含BamH I和Cla I酶切位點的hEPO基因引物,採用RT-PCR法從含有rhEPO基因的CHO細胞中剋隆hEPO基因片段,亞剋隆至pTRE2hyg真覈錶達載體.轉化感受態大腸桿菌Top10,酶切鑒定暘性重組子,併進行序列測定.結果經RT-PCR能擴增齣604bp的片段,與預期片段大小相符,構建的重組體經酶切鑒定能切齣插入片段,測序結果與預期序列完全一緻.結論成功構建瞭重組人EPO四環素調控真覈錶達載體pTRE2hyg-rhEPO.
목적구건병감정함유사배소조공적pTRE순식작용원건적질립형재체pTRE2hyg-rhEPO.방법설계함BamH I화Cla I매절위점적hEPO기인인물,채용RT-PCR법종함유rhEPO기인적CHO세포중극륭hEPO기인편단,아극륭지pTRE2hyg진핵표체재체.전화감수태대장간균Top10,매절감정양성중조자,병진행서렬측정.결과경RT-PCR능확증출604bp적편단,여예기편단대소상부,구건적중조체경매절감정능절출삽입편단,측서결과여예기서렬완전일치.결론성공구건료중조인EPO사배소조공진핵표체재체pTRE2hyg-rhEPO.
