生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
5期
527-531
,共5页
邵晓枫%徐晨%许元富%熊冬生%刘银星%杨纯正
邵曉楓%徐晨%許元富%熊鼕生%劉銀星%楊純正
소효풍%서신%허원부%웅동생%류은성%양순정
基因工程抗体%抗CD3抗体%嵌合抗体
基因工程抗體%抗CD3抗體%嵌閤抗體
기인공정항체%항CD3항체%감합항체
利用基因工程方法将鼠源性抗CD3抗体HIT3a的可变区和人源抗体(IgG)的完整的恒定区连接起来,构建全抗型抗CD3嵌合抗体,该型抗体具有较低的免疫源性可作为免疫抑制剂应用于器官移植,减少受体产生免疫排斥,提高移植器官的存活率.利用PCR方法从抗CD3 ScFv重组噬菌体表达载体pCANTAB 5E上扩增抗CD3抗体的轻链和重链可变区,将轻链和重链可变区组装到含有人抗体(IgG)恒定区的表达载体中,构建抗CD3嵌合抗体IgG的轻链和重链表达载体PKN100和PG1D105,并用脂质体法共转染CHO细胞.结果证明,抗CD3嵌合抗体的VL和VH与HIT3a抗体的VL和VH完全相符,ELISA和Western blot检测结果证实转染细胞的培养上清中含有抗CD3嵌合抗体IgG的表达,表达产物能与Jurkat细胞结合,并能竞争性抑制HIT3a抗体和Jurkat细胞结合活性,3H-TdR掺入实验表明, 抗CD3嵌合抗体与亲代抗体HIT3a一样,具有促进外周血单核细胞增殖的作用.我室构建的全抗型抗CD3嵌合抗体分子表达载体可在CHO细胞中稳定表达,表达产物有较好生物活性,具有潜在的临床应用价值.
利用基因工程方法將鼠源性抗CD3抗體HIT3a的可變區和人源抗體(IgG)的完整的恆定區連接起來,構建全抗型抗CD3嵌閤抗體,該型抗體具有較低的免疫源性可作為免疫抑製劑應用于器官移植,減少受體產生免疫排斥,提高移植器官的存活率.利用PCR方法從抗CD3 ScFv重組噬菌體錶達載體pCANTAB 5E上擴增抗CD3抗體的輕鏈和重鏈可變區,將輕鏈和重鏈可變區組裝到含有人抗體(IgG)恆定區的錶達載體中,構建抗CD3嵌閤抗體IgG的輕鏈和重鏈錶達載體PKN100和PG1D105,併用脂質體法共轉染CHO細胞.結果證明,抗CD3嵌閤抗體的VL和VH與HIT3a抗體的VL和VH完全相符,ELISA和Western blot檢測結果證實轉染細胞的培養上清中含有抗CD3嵌閤抗體IgG的錶達,錶達產物能與Jurkat細胞結閤,併能競爭性抑製HIT3a抗體和Jurkat細胞結閤活性,3H-TdR摻入實驗錶明, 抗CD3嵌閤抗體與親代抗體HIT3a一樣,具有促進外週血單覈細胞增殖的作用.我室構建的全抗型抗CD3嵌閤抗體分子錶達載體可在CHO細胞中穩定錶達,錶達產物有較好生物活性,具有潛在的臨床應用價值.
이용기인공정방법장서원성항CD3항체HIT3a적가변구화인원항체(IgG)적완정적항정구련접기래,구건전항형항CD3감합항체,해형항체구유교저적면역원성가작위면역억제제응용우기관이식,감소수체산생면역배척,제고이식기관적존활솔.이용PCR방법종항CD3 ScFv중조서균체표체재체pCANTAB 5E상확증항CD3항체적경련화중련가변구,장경련화중련가변구조장도함유인항체(IgG)항정구적표체재체중,구건항CD3감합항체IgG적경련화중련표체재체PKN100화PG1D105,병용지질체법공전염CHO세포.결과증명,항CD3감합항체적VL화VH여HIT3a항체적VL화VH완전상부,ELISA화Western blot검측결과증실전염세포적배양상청중함유항CD3감합항체IgG적표체,표체산물능여Jurkat세포결합,병능경쟁성억제HIT3a항체화Jurkat세포결합활성,3H-TdR참입실험표명, 항CD3감합항체여친대항체HIT3a일양,구유촉진외주혈단핵세포증식적작용.아실구건적전항형항CD3감합항체분자표체재체가재CHO세포중은정표체,표체산물유교호생물활성,구유잠재적림상응용개치.
