世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2005年
13期
1535-1539
,共5页
吴顺华%成军%郑玉建%张跃新%刘妍%郭江%张黎颍%王国荃
吳順華%成軍%鄭玉建%張躍新%劉妍%郭江%張黎潁%王國荃
오순화%성군%정옥건%장약신%류연%곽강%장려영%왕국전
肝癌%As2O3%抑制性消减杂交%多聚酶链反应%克隆
肝癌%As2O3%抑製性消減雜交%多聚酶鏈反應%剋隆
간암%As2O3%억제성소감잡교%다취매련반응%극륭
目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建As2O3处理的人肝癌细胞系H印G2差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆As2O3调节相关基因,阐明As2O3对肝细胞调节作用的分子生物学机制.方法:以As2O3处理HepG2细胞,同时以PBS处理的相同细胞系作为对照;24 h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌J109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建三As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到109个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-1 000 bp插入片段.挑取含有插入片段的36个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得15种已知基因序列和6个未知功能的新基因.结论:应用SSH技术成功构建了As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.
目的:應用抑製性消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH)技術構建As2O3處理的人肝癌細胞繫H印G2差異錶達基因的cDNA消減文庫,篩選併剋隆As2O3調節相關基因,闡明As2O3對肝細胞調節作用的分子生物學機製.方法:以As2O3處理HepG2細胞,同時以PBS處理的相同細胞繫作為對照;24 h後製備細胞裂解液,提取mRNA併逆轉錄為cDNA,經RsaI酶切後,將實驗組cDNA分成兩組,分彆與兩種不同的接頭銜接,再與對照組cDNA進行兩次消減雜交及兩次抑製性多聚酶鏈反應(PCR),將產物與T/A載體連接,構建cDNA消減文庫,併轉染大腸桿菌J109進行文庫擴增,隨機挑選剋隆PCR擴增後進行測序及同源性分析.結果:成功構建三As2O3處理HepG2細胞差異錶達基因的cDNA消減文庫.文庫擴增後得到109箇白色剋隆,進行菌落PCR分析,均得到200-1 000 bp插入片段.挑取含有插入片段的36箇剋隆進行測序,併通過生物信息學分析穫得15種已知基因序列和6箇未知功能的新基因.結論:應用SSH技術成功構建瞭As2O3處理HepG2細胞差異錶達基因的cDNA消減文庫.
목적:응용억제성소감잡교(suppression subtractive hybridization,SSH)기술구건As2O3처리적인간암세포계H인G2차이표체기인적cDNA소감문고,사선병극륭As2O3조절상관기인,천명As2O3대간세포조절작용적분자생물학궤제.방법:이As2O3처리HepG2세포,동시이PBS처리적상동세포계작위대조;24 h후제비세포렬해액,제취mRNA병역전록위cDNA,경RsaI매절후,장실험조cDNA분성량조,분별여량충불동적접두함접,재여대조조cDNA진행량차소감잡교급량차억제성다취매련반응(PCR),장산물여T/A재체련접,구건cDNA소감문고,병전염대장간균J109진행문고확증,수궤도선극륭PCR확증후진행측서급동원성분석.결과:성공구건삼As2O3처리HepG2세포차이표체기인적cDNA소감문고.문고확증후득도109개백색극륭,진행균락PCR분석,균득도200-1 000 bp삽입편단.도취함유삽입편단적36개극륭진행측서,병통과생물신식학분석획득15충이지기인서렬화6개미지공능적신기인.결론:응용SSH기술성공구건료As2O3처리HepG2세포차이표체기인적cDNA소감문고.
