生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2006年
6期
17-21
,共5页
乳酸乳球菌%表达系统%展示表达
乳痠乳毬菌%錶達繫統%展示錶達
유산유구균%표체계통%전시표체
目的:旨在构建一个将抗原靶向于乳酸乳球菌细胞表面的表达系统.方法:运用PCR技术从金黄色葡萄球菌基因组中克隆出蛋白A(SPA)C-末端544个碱基对的锚定域序列(Spax).通过酶切、连接将Spax构建入分泌型质粒pAMJ399形成携有整合外源基因位点Bgl Ⅱ的pAMJ400质粒.将报告蛋白-绿色荧光蛋白的基因(Gfg)插入载体pAMJ400的整合位点产生模式质粒pAMJ401并电转化其于乳酸乳球菌MG1363.绘制转化子MG1363(pAMJ401)生长曲线确认诱导期.调节pH值(6.0～6.5)诱导转化子并在荧光显微镜下观察杂合蛋白(GFP:SPAX)的表达情况.结果:在395nm的蓝色激发光下,诱导后的细菌发出较明亮的绿色荧光,而未诱导的细菌几乎不产生荧光.结论:成功地构建了乳酸乳球菌表面展示表达系统,此系统可以作为口服活菌疫菌研究的可行性操作平台.
目的:旨在構建一箇將抗原靶嚮于乳痠乳毬菌細胞錶麵的錶達繫統.方法:運用PCR技術從金黃色葡萄毬菌基因組中剋隆齣蛋白A(SPA)C-末耑544箇堿基對的錨定域序列(Spax).通過酶切、連接將Spax構建入分泌型質粒pAMJ399形成攜有整閤外源基因位點Bgl Ⅱ的pAMJ400質粒.將報告蛋白-綠色熒光蛋白的基因(Gfg)插入載體pAMJ400的整閤位點產生模式質粒pAMJ401併電轉化其于乳痠乳毬菌MG1363.繪製轉化子MG1363(pAMJ401)生長麯線確認誘導期.調節pH值(6.0～6.5)誘導轉化子併在熒光顯微鏡下觀察雜閤蛋白(GFP:SPAX)的錶達情況.結果:在395nm的藍色激髮光下,誘導後的細菌髮齣較明亮的綠色熒光,而未誘導的細菌幾乎不產生熒光.結論:成功地構建瞭乳痠乳毬菌錶麵展示錶達繫統,此繫統可以作為口服活菌疫菌研究的可行性操作平檯.
목적:지재구건일개장항원파향우유산유구균세포표면적표체계통.방법:운용PCR기술종금황색포도구균기인조중극륭출단백A(SPA)C-말단544개감기대적묘정역서렬(Spax).통과매절、련접장Spax구건입분비형질립pAMJ399형성휴유정합외원기인위점Bgl Ⅱ적pAMJ400질립.장보고단백-록색형광단백적기인(Gfg)삽입재체pAMJ400적정합위점산생모식질립pAMJ401병전전화기우유산유구균MG1363.회제전화자MG1363(pAMJ401)생장곡선학인유도기.조절pH치(6.0～6.5)유도전화자병재형광현미경하관찰잡합단백(GFP:SPAX)적표체정황.결과:재395nm적람색격발광하,유도후적세균발출교명량적록색형광,이미유도적세균궤호불산생형광.결론:성공지구건료유산유구균표면전시표체계통,차계통가이작위구복활균역균연구적가행성조작평태.
