CAJ | 학술논문

为了实现蛋白内含肽(Intein)介导的重组环状胸腺五肽结构类似物[cyclo-(Cys- Arg-Lys -Asp-Val-Tyr-),cTP]的高效制备,设计并合成编码6个氨基酸的cTP基因,克隆到表达载体pTWIN1,重组表达质粒pTW-cTp转化E.coliER2566构建工程菌,IPTG诱导由几丁质结合域纯化标签(chitin binding domain,CBD)、2个蛋白内含肽和目的多肽组成的"多元"融合蛋白(CBD-intein1-cTP-intein2-CBD)的高效表达.几丁质柱亲合层析纯化融合蛋白后,改变pH值和温度诱导intein1 C端切割,硫醇MESNA诱导intein2 N端切割,释放N端为Cys,C端为硫酯的重组cTP线性前体,通过非保护多肽硫酯环合法实现环肽生成.激光飞行质谱结果显示,纯化产物的分子量为764.4,与环肽的理论值相符.免疫活性检测结果显示,环肽cTP较线性多肽TP-5具有更显著的促进巨噬细胞吞噬能力的活性(P＜0.01)和促进B细胞抗体生成的活性(P＜0.01).
위료실현단백내함태(Intein)개도적중조배상흉선오태결구유사물[cyclo-(Cys- Arg-Lys -Asp-Val-Tyr-),cTP]적고효제비,설계병합성편마6개안기산적cTP기인,극륭도표체재체pTWIN1,중조표체질립pTW-cTp전화E.coliER2566구건공정균,IPTG유도유궤정질결합역순화표첨(chitin binding domain,CBD)、2개단백내함태화목적다태조성적"다원"융합단백(CBD-intein1-cTP-intein2-CBD)적고효표체.궤정질주친합층석순화융합단백후,개변pH치화온도유도intein1 C단절할,류순MESNA유도intein2 N단절할,석방N단위Cys,C단위류지적중조cTP선성전체,통과비보호다태류지배합법실현배태생성.격광비행질보결과현시,순화산물적분자량위764.4,여배태적이론치상부.면역활성검측결과현시,배태cTP교선성다태TP-5구유경현저적촉진거서세포탄서능력적활성(P＜0.01)화촉진B세포항체생성적활성(P＜0.01).