广东医学院学报
廣東醫學院學報
엄동의학원학보
JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE
2008年
2期
115-119
,共5页
林观平%李树梅%熊亮%周克元
林觀平%李樹梅%熊亮%週剋元
림관평%리수매%웅량%주극원
重组腺病毒%PTEN%基因治疗
重組腺病毒%PTEN%基因治療
중조선병독%PTEN%기인치료
目的 为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法.方法 用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAd Easy1的E.coli BJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后 ,转染293细胞, 检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后, 测其感染率.结果 获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-P TEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光.通过Western blot可检测到293细 胞中PTEN蛋白高效表达.Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞, 感染率达80%～90%.结论 PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高.
目的 為改進構建野生型抑癌基因PTEN重組腺病毒錶達載體的方法.方法 用抑癌基因PTEN與帶有綠色熒光蛋白基因的穿梭載體pAdTrack-CMV重組後轉化含腺病毒骨架載體pAd Easy1的E.coli BJ5183(Ad-1 cells),以穫得重組腺病毒質粒,經限製酶PacⅠ線性化後 ,轉染293細胞, 檢測PTEN蛋白的錶達,併以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7細胞後, 測其感染率.結果 穫得PTEN基因的重組腺病毒錶達載體(Ad-PTEN),受Ad-P TEN轉染的293細胞髮生腫脹或圓縮的形態改變,經PCR對傳代的Ad-PTEN分析證實得到目的基因PTEN,熒光顯微鏡下能觀察到293細胞內有綠色熒光.通過Western blot可檢測到293細 胞中PTEN蛋白高效錶達.Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7細胞, 感染率達80%～90%.結論 PTEN重組腺病毒錶達載體可在細菌體內進行同源重組而構建,方法較簡便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高.
목적 위개진구건야생형억암기인PTEN중조선병독표체재체적방법.방법 용억암기인PTEN여대유록색형광단백기인적천사재체pAdTrack-CMV중조후전화함선병독골가재체pAd Easy1적E.coli BJ5183(Ad-1 cells),이획득중조선병독질립,경한제매PacⅠ선성화후 ,전염293세포, 검측PTEN단백적표체,병이Ad-PTEN감염인유선암MCF-7세포후, 측기감염솔.결과 획득PTEN기인적중조선병독표체재체(Ad-PTEN),수Ad-P TEN전염적293세포발생종창혹원축적형태개변,경PCR대전대적Ad-PTEN분석증실득도목적기인PTEN,형광현미경하능관찰도293세포내유록색형광.통과Western blot가검측도293세 포중PTEN단백고효표체.Ad-PTEN감염적인유선암MCF-7세포, 감염솔체80%～90%.결론 PTEN중조선병독표체재체가재세균체내진행동원중조이구건,방법교간편、쾌속,차생성적병독적도고、감염솔고.
