华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2010年
3期
32-37
,共6页
曹伟军%李平花%白兴文%卢曾军%孙普%刘在新
曹偉軍%李平花%白興文%盧曾軍%孫普%劉在新
조위군%리평화%백흥문%로증군%손보%류재신
口蹄疫病毒%疫苗株%感染性 cDNA 克隆%病毒拯救
口蹄疫病毒%疫苗株%感染性 cDNA 剋隆%病毒拯救
구제역병독%역묘주%감염성 cDNA 극륭%병독증구
利用定点突变方法,构建含有预期突变的口蹄疫病毒O/HN/93株全长cDNA克隆,将全长cDNA的重组质粒线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,转染细胞盲传至第3代50 h后出现典型致细胞病变效应(CPE),第4代10 h出现典型的CPE.对收获的病毒分别用RT-PCR、分子标签测序、间接免疫荧光和电镜观察等进行鉴定,均证实成功拯救到了O/HN/93株FMDV.成功获得O/HN/93株的感染性分子克隆,为进一步研究抗原谱广、免疫原性好的候选疫苗株奠定了骨架基础.
利用定點突變方法,構建含有預期突變的口蹄疫病毒O/HN/93株全長cDNA剋隆,將全長cDNA的重組質粒線化後,與錶達T7 RNA聚閤酶的真覈質粒pcDNAT7P共轉染BHK-21細胞,轉染細胞盲傳至第3代50 h後齣現典型緻細胞病變效應(CPE),第4代10 h齣現典型的CPE.對收穫的病毒分彆用RT-PCR、分子標籤測序、間接免疫熒光和電鏡觀察等進行鑒定,均證實成功拯救到瞭O/HN/93株FMDV.成功穫得O/HN/93株的感染性分子剋隆,為進一步研究抗原譜廣、免疫原性好的候選疫苗株奠定瞭骨架基礎.
이용정점돌변방법,구건함유예기돌변적구제역병독O/HN/93주전장cDNA극륭,장전장cDNA적중조질립선화후,여표체T7 RNA취합매적진핵질립pcDNAT7P공전염BHK-21세포,전염세포맹전지제3대50 h후출현전형치세포병변효응(CPE),제4대10 h출현전형적CPE.대수획적병독분별용RT-PCR、분자표첨측서、간접면역형광화전경관찰등진행감정,균증실성공증구도료O/HN/93주FMDV.성공획득O/HN/93주적감염성분자극륭,위진일보연구항원보엄、면역원성호적후선역묘주전정료골가기출.
