改良型TAT-VP3融合蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体的制备
개량형TAT-VP3융합단백적원핵표체순화급다극륭항체적제비
Expression, purification of improved TAT-VP3 fusion protein and preparation of its polyclonal antibody
  • 万方数据
    现代泌尿生殖肿瘤杂志 현대비뇨생식종류잡지
    JOURNAL OF CONTEMPORARY UROLOGIC AND REPRODUCTIVE ONCOLOGY
    2012年 2期 90-93 ,共4页

    张之甲%李俊%詹辉%王剑松%颜汝平%丁明霞%刘靖宇%王伟%李宁

    장지갑%리준%첨휘%왕검송%안여평%정명하%류정우%왕위%리저

    融合蛋白%蛋白纯化%多克隆抗体 融閤蛋白%蛋白純化%多剋隆抗體
    융합단백%단백순화%다극륭항체
    目的 表达、纯化改良型TAT-VP3融合蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 利用原核表达载体PGEX-6P-1/改良型TAT-VP3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经GST标签纯化树脂纯化蛋白,并用PreScission Protease酶切除标签,以纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,获得改良型TAT-VP3融合蛋白的多克隆抗体.用ELISA进行效价检测,Western blotting鉴定其特异性.结果 诱导表达并纯化了改良型TAT-VP3融合蛋白,纯度大于90%,蛋白浓度为1.2 mg/ml.制备了该蛋白的多克隆抗体,ELISA表明多克隆抗体效价为1∶32 000,Western blotting证明多克隆抗体的特异性良好.结论 成功纯化出改良型TAT-VP3融合蛋白,并制备出高效价、高特异性的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的体内外抗肿瘤活性及作用机制奠定了基础.
    목적 표체、순화개량형TAT-VP3융합단백,병제비기다극륭항체.방법 이용원핵표체재체PGEX-6P-1/개량형TAT-VP3재대장간균Rosetta(DE3)중표체,경GST표첨순화수지순화단백,병용PreScission Protease매절제표첨,이순화적단백면역신서란대백토,획득개량형TAT-VP3융합단백적다극륭항체.용ELISA진행효개검측,Western blotting감정기특이성.결과 유도표체병순화료개량형TAT-VP3융합단백,순도대우90%,단백농도위1.2 mg/ml.제비료해단백적다극륭항체,ELISA표명다극륭항체효개위1∶32 000,Western blotting증명다극륭항체적특이성량호.결론 성공순화출개량형TAT-VP3융합단백,병제비출고효개、고특이성적다극륭항체,위진일보연구해단백적체내외항종류활성급작용궤제전정료기출.
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