双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立
쌍표기선택재체전염우태인성섬유세포방법적건립
  • 万方数据
    自然科学进展 자연과학진전
    zirankexuejinzhan
    2002年 12期 1318-1320 ,共3页

    龚国春%戴蕴平%樊宝良%赵春江%王莉莉%王海平%郑敏%李宁

    공국춘%대온평%번보량%조춘강%왕리리%왕해평%정민%리저

    双标记选择载体%牛%胎儿成纤维细胞%电击%基因转染 雙標記選擇載體%牛%胎兒成纖維細胞%電擊%基因轉染
    쌍표기선택재체%우%태인성섬유세포%전격%기인전염
    以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10 5 个细胞的最佳转染效率.通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度.从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存.经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因.
    이경SspI화BamHI대소구건적쌍표기선택재체질립pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB쌍매절후적선성목적DNA위외원기인,대전격개도적우태인성섬유세포기인전염방법적효솔진행료우화.실험결과표명,당전장강도위1.2kV/cm、맥충시간위1ms시가획득약50개양성세포극륭/10 5 개세포적최가전염효솔.통과우태인성섬유세포대불동농도G418항성적민감성실험학정800μg/mL G418위쾌속사선농도,이300μg/mL G418위유지사선농도.종량개우태인성섬유세포계중공분리료56개록색형광단백(GFP)양성세포극륭,종중선취2개냉동보존.경PCR검측,증실2개냉동극륭주균함유소전염적외원기인.
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