第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2004年
9期
962-965
,共4页
朱诗应%赵平%任浩%赵兰娟%戚中田
硃詩應%趙平%任浩%趙蘭娟%慼中田
주시응%조평%임호%조란연%척중전
肝炎病毒,丙型%核心蛋白%截短的E2蛋白%昆虫Sf 9细胞
肝炎病毒,丙型%覈心蛋白%截短的E2蛋白%昆蟲Sf 9細胞
간염병독,병형%핵심단백%절단적E2단백%곤충Sf 9세포
目的:构建含HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白E2基因的重组杆状病毒表达载体,研究其表达和抗原性.方法:以含HCV全长cDNA克隆的pGEM-HCJ4质粒为模板,PCR扩增全长的HCV核心抗原基因和截短的E2基因片段,插入转座载体pFastBacHTa构建重组转座质粒pFB-CE2t,转化DH10Bac大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CE2t,以之转染昆虫Sf 9细胞进行外源基因的表达,并对其抗原性进行ELISA检测.结果:SDS-PAGE和Western blot分析表明Bacmid-CE2t在Sf 9细胞表达了HCV C-E2蛋白,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的C蛋白和截短的E2蛋白.纯化后的蛋白能分别与HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应.结论:HCV核心蛋白和截短的E2蛋白在昆虫细胞中成功表达并具有抗原性.
目的:構建含HCV全長覈心基因和截短的包膜蛋白E2基因的重組桿狀病毒錶達載體,研究其錶達和抗原性.方法:以含HCV全長cDNA剋隆的pGEM-HCJ4質粒為模闆,PCR擴增全長的HCV覈心抗原基因和截短的E2基因片段,插入轉座載體pFastBacHTa構建重組轉座質粒pFB-CE2t,轉化DH10Bac大腸桿菌,穫得重組桿狀病毒穿梭質粒Bacmid-CE2t,以之轉染昆蟲Sf 9細胞進行外源基因的錶達,併對其抗原性進行ELISA檢測.結果:SDS-PAGE和Western blot分析錶明Bacmid-CE2t在Sf 9細胞錶達瞭HCV C-E2蛋白,併能利用細胞內蛋白酶將其裂解為單獨的C蛋白和截短的E2蛋白.純化後的蛋白能分彆與HCV C蛋白、E2蛋白單抗以及慢性丙型肝炎患者血清反應.結論:HCV覈心蛋白和截短的E2蛋白在昆蟲細胞中成功錶達併具有抗原性.
목적:구건함HCV전장핵심기인화절단적포막단백E2기인적중조간상병독표체재체,연구기표체화항원성.방법:이함HCV전장cDNA극륭적pGEM-HCJ4질립위모판,PCR확증전장적HCV핵심항원기인화절단적E2기인편단,삽입전좌재체pFastBacHTa구건중조전좌질립pFB-CE2t,전화DH10Bac대장간균,획득중조간상병독천사질립Bacmid-CE2t,이지전염곤충Sf 9세포진행외원기인적표체,병대기항원성진행ELISA검측.결과:SDS-PAGE화Western blot분석표명Bacmid-CE2t재Sf 9세포표체료HCV C-E2단백,병능이용세포내단백매장기렬해위단독적C단백화절단적E2단백.순화후적단백능분별여HCV C단백、E2단백단항이급만성병형간염환자혈청반응.결론:HCV핵심단백화절단적E2단백재곤충세포중성공표체병구유항원성.
