Kir2ds4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
Kir2ds4기인RNAi만병독재체적구건여감정
Construction and Identification of Kir2ds4 RNAi Lentiviral Vector
  • 万方数据
    中国实验血液学杂志 중국실험혈액학잡지
    JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
    2008年 3期 663-666 ,共4页

    窦立萍%达万明%王畅%康慧媛%赵瑜%孙敬芬%靳海杰%王全顺%高春记%于力

    두립평%체만명%왕창%강혜원%조유%손경분%근해걸%왕전순%고춘기%우력

    RNA干扰%kir2ds4基因%慢病毒载体 RNA榦擾%kir2ds4基因%慢病毒載體
    RNA간우%kir2ds4기인%만병독재체
    本研究旨在构建kir2ds4基因RNAi慢病毒载体.针对已经筛选确定的kir2ds4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shkir2ds4慢病毒载体,应用PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定.用LV-shkir2ds4,包装系统质粒共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果表明,PCR和测序结果证实成功地构建了kir2ds4shRNA的慢病毒栽体LV-shkir2ds4.293T细胞测定病毒滴度为6×10 8TU/ml.结论:成功地构建了人kir2ds4基因RNAi慢病毒载体.
    본연구지재구건kir2ds4기인RNAi만병독재체.침대이경사선학정적kir2ds4기인RNAi유효파서렬,합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경Hpa Ⅰ화Xho Ⅰ매절후적pSicoR-GFP재체[함U6계동자화록색형광단백(GFP)]련접산생LV-shkir2ds4만병독재체,응용PCR사선양성극륭병진행측서감정.용LV-shkir2ds4,포장계통질립공전염포장세포293T세포,산생만병독과립,이293T세포GFP단백적표체수평측정병독적도.결과표명,PCR화측서결과증실성공지구건료kir2ds4shRNA적만병독재체LV-shkir2ds4.293T세포측정병독적도위6×10 8TU/ml.결론:성공지구건료인kir2ds4기인RNAi만병독재체.
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