CAJ | 학술논문

目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础.
목적:종인류유선암내다유비성세포주세포(MCF-7/Adr)중극륭CD44기인병구건CD44기인진핵표체재체pcDNA3.1-CD44;장pcNDA3.1-CD44은정전염입인유선암세포주(MCF-7)세포중.방법:종MCF-7/Adr세포중제취총RNA진행RT-PCR,획득전장적cDNA모판;장함유CD44기인적cDNA모판사용한제성내절매진행쌍매절획득대유매절위점적CD44기인,재장대유매절위점적CD44기인경TA극륭후측서험증,연후아극륭입진핵표체재체pcDNA3.1중,쌍매절감정후재차측서험증.지질체법장pcDNA3.1-CD44질립전염도MCF-7세포중,48소시후RT-PCR화류식세포술검측전염전후CD44기인、단백재MCF-7세포적표체변화.결과:성공종인MCF-7/Adr세포중극륭획득CD44기인병구건진핵표체재체,전염후재MCF-7중검측도CD44기인mRNA화단백수평표체상조;장상술표체CD44기인급단백적순시전염MCF-7세포경G418사선량주후획득양성극륭.결론:성공극륭화건립인CD44기인진핵표체질립;pcDNA3.1-CD44능재MCF-7세포중표체;재MCF-7/Adr중신발현일충CD44기인적변이체(기인고호FJ216964);저위진일보연구기기인공능타하료기출.