蚌埠医学院学报
蚌埠醫學院學報
방부의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE BENGBU
2012年
4期
376-379
,共4页
生长因子受体结合蛋白质7%SH2结构域%谷胱甘肽巯基转移酶%基因表达%纯化
生長因子受體結閤蛋白質7%SH2結構域%穀胱甘肽巰基轉移酶%基因錶達%純化
생장인자수체결합단백질7%SH2결구역%곡광감태구기전이매%기인표체%순화
目的:探讨Grb7蛋白SH2结构域的表达及其纯化的方法.方法:将Grb7蛋白SH2结构域编码基因与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)标签编码基因构建为融合基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆酶切位点EcoRⅠ与XhoⅠ之间,挑选测序正确的质粒将其转染至BL 21感受态细胞内,感受态细胞于37 ℃摇培至其OD值达到0.6～0.8后,经0.2 mmol/L IPTG 25 ℃过夜诱导表达融合蛋白,MALDI-TOF质谱检测蛋白纯化产物,SPR生物传感器(Biacore 3000) 检测纯化蛋白与天然配体磷酸化肽段的相互作用.结果:GST-Grb7 SH2 结构域融合蛋白在裂解菌液的上清液中存在,500 ml LB/Amp菌液可纯化得到415 μg GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,MALDI-TOF质谱图上可见明显目的蛋白峰,Biacore 3000检测到纯化蛋白可结合不同浓度的磷酸化肽段配体.结论:运用改进的GST融合蛋白纯化方法可得到具有一定纯度及生物学活性的GST-Grb7 SH2结构域融合蛋白,为该蛋白结构域后续功能研究奠定了基础.
目的:探討Grb7蛋白SH2結構域的錶達及其純化的方法.方法:將Grb7蛋白SH2結構域編碼基因與穀胱甘肽巰基轉移酶(GST)標籤編碼基因構建為融閤基因,插入原覈錶達載體pGEX-4T-1的多剋隆酶切位點EcoRⅠ與XhoⅠ之間,挑選測序正確的質粒將其轉染至BL 21感受態細胞內,感受態細胞于37 ℃搖培至其OD值達到0.6～0.8後,經0.2 mmol/L IPTG 25 ℃過夜誘導錶達融閤蛋白,MALDI-TOF質譜檢測蛋白純化產物,SPR生物傳感器(Biacore 3000) 檢測純化蛋白與天然配體燐痠化肽段的相互作用.結果:GST-Grb7 SH2 結構域融閤蛋白在裂解菌液的上清液中存在,500 ml LB/Amp菌液可純化得到415 μg GST-Grb7 SH2結構域融閤蛋白,MALDI-TOF質譜圖上可見明顯目的蛋白峰,Biacore 3000檢測到純化蛋白可結閤不同濃度的燐痠化肽段配體.結論:運用改進的GST融閤蛋白純化方法可得到具有一定純度及生物學活性的GST-Grb7 SH2結構域融閤蛋白,為該蛋白結構域後續功能研究奠定瞭基礎.
목적:탐토Grb7단백SH2결구역적표체급기순화적방법.방법:장Grb7단백SH2결구역편마기인여곡광감태구기전이매(GST)표첨편마기인구건위융합기인,삽입원핵표체재체pGEX-4T-1적다극륭매절위점EcoRⅠ여XhoⅠ지간,도선측서정학적질립장기전염지BL 21감수태세포내,감수태세포우37 ℃요배지기OD치체도0.6～0.8후,경0.2 mmol/L IPTG 25 ℃과야유도표체융합단백,MALDI-TOF질보검측단백순화산물,SPR생물전감기(Biacore 3000) 검측순화단백여천연배체린산화태단적상호작용.결과:GST-Grb7 SH2 결구역융합단백재렬해균액적상청액중존재,500 ml LB/Amp균액가순화득도415 μg GST-Grb7 SH2결구역융합단백,MALDI-TOF질보도상가견명현목적단백봉,Biacore 3000검측도순화단백가결합불동농도적린산화태단배체.결론:운용개진적GST융합단백순화방법가득도구유일정순도급생물학활성적GST-Grb7 SH2결구역융합단백,위해단백결구역후속공능연구전정료기출.
