内蒙古大学学报（自然科学版）
內矇古大學學報（自然科學版）
내몽고대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS NEIMONGOL
2012年
2期
141-147
,共7页
肖红%高圆%梁伟%高笑宇%汪慧%杜晓媛%郭旭东%刘东军
肖紅%高圓%樑偉%高笑宇%汪慧%杜曉媛%郭旭東%劉東軍
초홍%고원%량위%고소우%왕혜%두효원%곽욱동%류동군
绒山羊%胰岛素样生长因子Ⅰ%红色荧光蛋白%毛囊细胞%胎儿成纤维细胞
絨山羊%胰島素樣生長因子Ⅰ%紅色熒光蛋白%毛囊細胞%胎兒成纖維細胞
융산양%이도소양생장인자Ⅰ%홍색형광단백%모낭세포%태인성섬유세포
构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1 cDNA序列,连接到含有UHS启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI；pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+ 10％ FBS、37℃5％CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.
構建IGF1基因的毛囊特異錶達載體,可為今後通過體細胞覈移植技術建立轉基因剋隆絨山羊準備覈供體細胞.將綿羊IGF1 cDNA序列,連接到含有UHS啟動子序列的剋隆載體p19TU的SalI、SphI位點,穫得過渡質粒載體p19TUI；pCDsRed2和過渡質粒載體分彆經酶切和連接構成錶達載體pCDsR-UI.以組織塊貼附法分離和培養絨山羊胎兒成纖維細胞,外源性錶達載體以脂質體方法轉染所培養的第2代成纖維細胞,DMEM/F12+ 10％ FBS、37℃5％CO2中培養,經添加G418篩選,穫得瞭穩定錶達紅色熒光蛋白的細胞剋隆,經特異性PCR鑒定證實外源基因已經整閤在細胞基因組中.轉基因前後分析細胞生長麯線和染色體覈型證明轉基因細胞的生長狀態良好、各項參數正常.
구건IGF1기인적모낭특이표체재체,가위금후통과체세포핵이식기술건립전기인극륭융산양준비핵공체세포.장면양IGF1 cDNA서렬,련접도함유UHS계동자서렬적극륭재체p19TU적SalI、SphI위점,획득과도질립재체p19TUI；pCDsRed2화과도질립재체분별경매절화련접구성표체재체pCDsR-UI.이조직괴첩부법분리화배양융산양태인성섬유세포,외원성표체재체이지질체방법전염소배양적제2대성섬유세포,DMEM/F12+ 10％ FBS、37℃5％CO2중배양,경첨가G418사선,획득료은정표체홍색형광단백적세포극륭,경특이성PCR감정증실외원기인이경정합재세포기인조중.전기인전후분석세포생장곡선화염색체핵형증명전기인세포적생장상태량호、각항삼수정상.
