基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2002年
4期
324-327，329
,共5页
张云%王树蕙%郭彩云%李文辉%扬帆
張雲%王樹蕙%郭綵雲%李文輝%颺帆
장운%왕수혜%곽채운%리문휘%양범
乳腺癌%人单克隆抗体CM-1%单链抗体
乳腺癌%人單剋隆抗體CM-1%單鏈抗體
유선암%인단극륭항체CM-1%단련항체
研究解决分泌人单抗的杂交瘤细胞系难于稳定持久分泌抗体的难题,制备单链抗体,使单抗分子小型化,为进一步研究其在肿瘤诊断和治疗中的应用作准备.从分泌抗乳腺癌人单抗的杂交瘤细胞CM-1总RNA中,利用RT-PCR技术分别扩增出人单抗重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,将扩增产物纯化后克隆于pGEM-T载体中,进行DNA测序和序列比较分析后,将两者共克隆于表达载体中诱导表达,利用斑点免疫印迹及竞争抑制法检测表达产物的抗原性. 所克隆的CM-1人单抗重链可变区和轻链可变区基因片段,分别属于人免疫球蛋白IgM Ⅲ亚群,和鼠κ轻链V亚群,ⅩⅦ家族,用斑点免疫印迹法检测可见表达产物能与人乳腺癌细胞特异结合;人CM-1单克隆抗体对此单链抗体与人乳腺癌细胞的结合有竞争性抑制作用,抑制率为75.7%.结论成功地制备了可特异结合乳腺癌细胞的CM-1单链抗体.
研究解決分泌人單抗的雜交瘤細胞繫難于穩定持久分泌抗體的難題,製備單鏈抗體,使單抗分子小型化,為進一步研究其在腫瘤診斷和治療中的應用作準備.從分泌抗乳腺癌人單抗的雜交瘤細胞CM-1總RNA中,利用RT-PCR技術分彆擴增齣人單抗重鏈可變區VH基因和輕鏈可變區VL基因,將擴增產物純化後剋隆于pGEM-T載體中,進行DNA測序和序列比較分析後,將兩者共剋隆于錶達載體中誘導錶達,利用斑點免疫印跡及競爭抑製法檢測錶達產物的抗原性. 所剋隆的CM-1人單抗重鏈可變區和輕鏈可變區基因片段,分彆屬于人免疫毬蛋白IgM Ⅲ亞群,和鼠κ輕鏈V亞群,ⅩⅦ傢族,用斑點免疫印跡法檢測可見錶達產物能與人乳腺癌細胞特異結閤;人CM-1單剋隆抗體對此單鏈抗體與人乳腺癌細胞的結閤有競爭性抑製作用,抑製率為75.7%.結論成功地製備瞭可特異結閤乳腺癌細胞的CM-1單鏈抗體.
연구해결분비인단항적잡교류세포계난우은정지구분비항체적난제,제비단련항체,사단항분자소형화,위진일보연구기재종류진단화치료중적응용작준비.종분비항유선암인단항적잡교류세포CM-1총RNA중,이용RT-PCR기술분별확증출인단항중련가변구VH기인화경련가변구VL기인,장확증산물순화후극륭우pGEM-T재체중,진행DNA측서화서렬비교분석후,장량자공극륭우표체재체중유도표체,이용반점면역인적급경쟁억제법검측표체산물적항원성. 소극륭적CM-1인단항중련가변구화경련가변구기인편단,분별속우인면역구단백IgM Ⅲ아군,화서κ경련V아군,ⅩⅦ가족,용반점면역인적법검측가견표체산물능여인유선암세포특이결합;인CM-1단극륭항체대차단련항체여인유선암세포적결합유경쟁성억제작용,억제솔위75.7%.결론성공지제비료가특이결합유선암세포적CM-1단련항체.
