科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2002年
22期
1718-1721
,共4页
刘俊峰%王新泉%徐磊%张季平%梁栋材%常文瑞
劉俊峰%王新泉%徐磊%張季平%樑棟材%常文瑞
류준봉%왕신천%서뢰%장계평%량동재%상문서
蚯蚓纤溶酶%cDNA%原核表达
蚯蚓纖溶酶%cDNA%原覈錶達
구인섬용매%cDNA%원핵표체
蚯蚓纤溶酶组分A是赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)体内纤溶酶的主要组分之一, 具有双重纤溶活性. 用逆转录PCR(RT-PCR)的方法从赤子爱胜蚓中克隆了编码蚯蚓纤溶酶组分A的cDNA, 由其推测的氨基酸序列与丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族的成员具有较高的同源性, 而且具有其保守的催化位点, 表明该蛋白质可能是胰蛋白酶家族的成员. 将上述cDNA导入大肠杆菌的表达载体pQE31和pMAL-c2X, 构建表达质粒pQE-efea和pMAL-efea, 这2个表达质粒均可以在大肠杆菌菌株M15中诱导表达出与预期大小相近的重组蛋白. 其中, pQE-efea表达的His6-EFEa主要以包涵体形式存在, 而pMAL-efea表达的重组蛋白MBP-EFEa是可溶性的, 并且具有纤溶活性.
蚯蚓纖溶酶組分A是赤子愛勝蚓(Eisenia fetida)體內纖溶酶的主要組分之一, 具有雙重纖溶活性. 用逆轉錄PCR(RT-PCR)的方法從赤子愛勝蚓中剋隆瞭編碼蚯蚓纖溶酶組分A的cDNA, 由其推測的氨基痠序列與絲氨痠蛋白酶類胰蛋白酶傢族的成員具有較高的同源性, 而且具有其保守的催化位點, 錶明該蛋白質可能是胰蛋白酶傢族的成員. 將上述cDNA導入大腸桿菌的錶達載體pQE31和pMAL-c2X, 構建錶達質粒pQE-efea和pMAL-efea, 這2箇錶達質粒均可以在大腸桿菌菌株M15中誘導錶達齣與預期大小相近的重組蛋白. 其中, pQE-efea錶達的His6-EFEa主要以包涵體形式存在, 而pMAL-efea錶達的重組蛋白MBP-EFEa是可溶性的, 併且具有纖溶活性.
구인섬용매조분A시적자애성인(Eisenia fetida)체내섬용매적주요조분지일, 구유쌍중섬용활성. 용역전록PCR(RT-PCR)적방법종적자애성인중극륭료편마구인섬용매조분A적cDNA, 유기추측적안기산서렬여사안산단백매류이단백매가족적성원구유교고적동원성, 이차구유기보수적최화위점, 표명해단백질가능시이단백매가족적성원. 장상술cDNA도입대장간균적표체재체pQE31화pMAL-c2X, 구건표체질립pQE-efea화pMAL-efea, 저2개표체질립균가이재대장간균균주M15중유도표체출여예기대소상근적중조단백. 기중, pQE-efea표체적His6-EFEa주요이포함체형식존재, 이pMAL-efea표체적중조단백MBP-EFEa시가용성적, 병차구유섬용활성.
