CAJ | 학술논문

目的利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用.方法分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293(HEK293)细胞48 h后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R).结果重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在细胞质和细胞核中存在着共定位,FRET检测结果显示其能量转移率为14%,两个分子间的作用距离为6.3 nm.结论成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实了活体细胞内ITGB4BP和P311间存在着相互作用.
목적 이용격광공취초현미경중적형광공진능량전이(FRET)기술래험증정합소4결합단백(ITGB4BP)화P311간적상호작용.방법 분별구건능재포유동물세포중표체ITGB4BP적록색형광융합단백ITGB4BP-EGFP화표체P311적홍색형광융합단백P311-DsRed적중조재체pITGB4BP-EGFP화pP311-DsRed,경매절여측서감정정학후,공전염인배신293(HEK293)세포48 h후,채용수체표백방법(P311-DsRed),검측ITGB4BP화P311간적능량전이솔(E)화상호간적작용거리(R).결과 중조재체pITGB4BP-EGFP화pP311-DsRed경쌍매절감정정학,전염293세포후경격광공취초현미경관찰능분별표체융합단백ITGB4BP-EGFP화P311-DsRed,재세포질화세포핵중존재착공정위,FRET검측결과현시기능량전이솔위14%,량개분자간적작용거리위6.3 nm.결론 성공구건료ITGB4BP-EGFP화P311-DsRed융합단백진핵표체중조재체,재포유동물세포중진행료표체후,이용FRET기술증실료활체세포내ITGB4BP화P311간존재착상호작용.