蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2008年
4期
627-633
,共7页
章玉萍%蒋剑豪%赵云坡%樊美珍%黄勇平%苗雪霞
章玉萍%蔣劍豪%趙雲坡%樊美珍%黃勇平%苗雪霞
장옥평%장검호%조운파%번미진%황용평%묘설하
G蛋白%γ1-亚基%家蚕%克隆%基因表达
G蛋白%γ1-亞基%傢蠶%剋隆%基因錶達
G단백%γ1-아기%가잠%극륭%기인표체
异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导.为了研究家蚕体内G蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕G蛋白γ1亚基(Gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕Gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入E.coli BL21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,GST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物.家蚕Gγ1重组GST融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕Gγ1基因,并在E.coli BL21中高效表达.
異三元G蛋白是真覈細胞感知外界信號後將信號傳遞到胞內的重要分子,參與生物體廣汎的信號轉導.為瞭研究傢蠶體內G蛋白的生理功能及其作用機製,運用生物信息學方法預測瞭傢蠶G蛋白γ1亞基(Gγ1)的序列,設計引物驗證預測序列後,剋隆瞭傢蠶Gγ1的序列,再通過酶切剋隆至錶達載體pET-41b(+)後,導入E.coli BL21宿主菌中,經異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達重組穀胱甘肽硫轉移酶(glutathione s-transferase,GST)融閤蛋白,併親和層析純化錶達產物.傢蠶Gγ1重組GST融閤蛋白經SDS-PAGE電泳和Western blot分析,在分子質量約36 kD處齣現特異性蛋白條帶,重組蛋白經GST親和層析柱純化後,得到瞭高純度的融閤蛋白,說明已經成功剋隆到傢蠶Gγ1基因,併在E.coli BL21中高效錶達.
이삼원G단백시진핵세포감지외계신호후장신호전체도포내적중요분자,삼여생물체엄범적신호전도.위료연구가잠체내G단백적생리공능급기작용궤제,운용생물신식학방법예측료가잠G단백γ1아기(Gγ1)적서렬,설계인물험증예측서렬후,극륭료가잠Gγ1적서렬,재통과매절극륭지표체재체pET-41b(+)후,도입E.coli BL21숙주균중,경이병기β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체중조곡광감태류전이매(glutathione s-transferase,GST)융합단백,병친화층석순화표체산물.가잠Gγ1중조GST융합단백경SDS-PAGE전영화Western blot분석,재분자질량약36 kD처출현특이성단백조대,중조단백경GST친화층석주순화후,득도료고순도적융합단백,설명이경성공극륭도가잠Gγ1기인,병재E.coli BL21중고효표체.
