贵州科学
貴州科學
귀주과학
GUIZHOU SCIENCE
2009年
2期
45-49
,共5页
磷酸酯酶2A%载体构建%重组蛋白%原核表达
燐痠酯酶2A%載體構建%重組蛋白%原覈錶達
린산지매2A%재체구건%중조단백%원핵표체
利用PCR技术,从水稻品种日本晴幼穗cDNA中扩增磷酸酯酶2A的基因ORF片段,并将其克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中构建重组质粒pGEX-6p-1-PP-2A,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载体pGEX-6p-1-PP2A,转化E.coli JM109并通过终浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导,表达出39kD的GST-PP2A融合蛋白,并用蛋白亲和层析柱GSTrap FF对表达产物进行纯化,为下一步的研究打下了实验基础.
利用PCR技術,從水稻品種日本晴幼穗cDNA中擴增燐痠酯酶2A的基因ORF片段,併將其剋隆入原覈錶達載體pGEX-6p-1中構建重組質粒pGEX-6p-1-PP-2A,經限製性內切酶酶切鑒定以及測序結果錶明成功構建瞭原覈錶達載體pGEX-6p-1-PP2A,轉化E.coli JM109併通過終濃度為0.4mmol/L的IPTG誘導,錶達齣39kD的GST-PP2A融閤蛋白,併用蛋白親和層析柱GSTrap FF對錶達產物進行純化,為下一步的研究打下瞭實驗基礎.
이용PCR기술,종수도품충일본청유수cDNA중확증린산지매2A적기인ORF편단,병장기극륭입원핵표체재체pGEX-6p-1중구건중조질립pGEX-6p-1-PP-2A,경한제성내절매매절감정이급측서결과표명성공구건료원핵표체재체pGEX-6p-1-PP2A,전화E.coli JM109병통과종농도위0.4mmol/L적IPTG유도,표체출39kD적GST-PP2A융합단백,병용단백친화층석주GSTrap FF대표체산물진행순화,위하일보적연구타하료실험기출.
