国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2010年
10期
1096-1098
,共3页
干扰素类%细胞%基因表达%突变
榦擾素類%細胞%基因錶達%突變
간우소류%세포%기인표체%돌변
目的 研究人β干扰素突变体在杆状表达系统中的高效表达,为新型基因药物的研制提供可行性.方法 采用PCR定点突变技术构建人干扰素bS17突变基因,克隆到pFastBacTM HT B上,获得重组转移载体pFastBac-IFNβS17.将pFastBac-IFNβS17转化入DH10BacTM细胞,得到Bacmid-IFNβS17.将Baemid-IFNβS17转染sf9细胞,筛选到重组病毒Bac-IFNβS17.将Bac-IFNβS17感染sf9细胞进行表达.结果 Southern-blot证明IFNβS17已插入重组病毒中(3.9 kb左右的杂交带);SDS-PAGE、蛋白质印迹证明IFNβS17在sf9细胞中得到了表达.实验表明sf9细胞中120 h的表达产物干扰素活性最高,为2.62×105 IU/mL.结论 突变基因在sf9细胞得到了高效表达,且表达的重组蛋白具有IFN的生物活性.
目的 研究人β榦擾素突變體在桿狀錶達繫統中的高效錶達,為新型基因藥物的研製提供可行性.方法 採用PCR定點突變技術構建人榦擾素bS17突變基因,剋隆到pFastBacTM HT B上,穫得重組轉移載體pFastBac-IFNβS17.將pFastBac-IFNβS17轉化入DH10BacTM細胞,得到Bacmid-IFNβS17.將Baemid-IFNβS17轉染sf9細胞,篩選到重組病毒Bac-IFNβS17.將Bac-IFNβS17感染sf9細胞進行錶達.結果 Southern-blot證明IFNβS17已插入重組病毒中(3.9 kb左右的雜交帶);SDS-PAGE、蛋白質印跡證明IFNβS17在sf9細胞中得到瞭錶達.實驗錶明sf9細胞中120 h的錶達產物榦擾素活性最高,為2.62×105 IU/mL.結論 突變基因在sf9細胞得到瞭高效錶達,且錶達的重組蛋白具有IFN的生物活性.
목적 연구인β간우소돌변체재간상표체계통중적고효표체,위신형기인약물적연제제공가행성.방법 채용PCR정점돌변기술구건인간우소bS17돌변기인,극륭도pFastBacTM HT B상,획득중조전이재체pFastBac-IFNβS17.장pFastBac-IFNβS17전화입DH10BacTM세포,득도Bacmid-IFNβS17.장Baemid-IFNβS17전염sf9세포,사선도중조병독Bac-IFNβS17.장Bac-IFNβS17감염sf9세포진행표체.결과 Southern-blot증명IFNβS17이삽입중조병독중(3.9 kb좌우적잡교대);SDS-PAGE、단백질인적증명IFNβS17재sf9세포중득도료표체.실험표명sf9세포중120 h적표체산물간우소활성최고,위2.62×105 IU/mL.결론 돌변기인재sf9세포득도료고효표체,차표체적중조단백구유IFN적생물활성.
