CAJ | 학술논문

肝细胞生长因子基因转染大鼠急性脑卒中模型的生物效应
간세포생장인자기인전염대서급성뇌졸중모형적생물효응
Biological effect of hepatocyte growth factor gene transfection to rat cerebral ischemic model: the experimental study

万方数据

中华放射学杂志中華放射學雜誌 중화방사학잡지
Chinese Journal of Radiology
2007年 3期 308-311 ,共4页

张晓波%金征宇%李明利%王任直%李桂林%孔燕国%王建明%高山%关鸿志%王德田%罗玉凤

장효파%금정우%리명리%왕임직%리계림%공연국%왕건명%고산%관홍지%왕덕전%라옥봉

肝细胞生长因子%脑缺血%小鼠,转基因肝細胞生長因子%腦缺血%小鼠,轉基因
간세포생장인자%뇌결혈%소서,전기인

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应.方法 39只实验用大鼠,线栓法制备成可控性急性大鼠脑卒中模型.利用基因重组技术将HGF基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因标记的真核表达载体PIRES2-EGFP进行融合,构建真核细胞表达质粒.通过脂质体介导法,立体定向下多点注射到大鼠急性脑卒中模型的缺血半暗带区域行基因转染,转染7 d后断头取大鼠脑组织,切片观察HGF基因在大鼠脑内的表达情况;并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体对大鼠脑组织进行免疫组化染色,显微镜下随机检测5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量;同时在基因转染前及转染后7 d,应用CT灌注扫描对实验鼠脑血流量进行监测,观察基因转染对脑血流量的影响.将大鼠脑卒中模型随机分成3组(每组13只):(1)注射脂质体/pIRES2-EGFP-HGF质粒的实验组;(2)注射脂质体/PIRES2-EGFP空载质粒的空载体对照组;(3)空白对照组(未进行注射).结果酶切鉴定及基因测序证实,HGF基因片段已克隆到PIRES2-EGFP的BamH I和Sal I位点之间.HGF基因转染大鼠缺血半暗带区7 d后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达,用免疫组化方法进一步证实了HGF的表达.实验组大鼠转染局部血管数量(46.71±7.11)条/5个高倍视野,明显多于对照组的(20.43±3.21)条/5个高倍视野和空白对照组的(18.00±3.27)条/5个高倍视野(F=74.447;P＜0.01);CT灌注显示其梗死侧大脑半球的脑血流量(63.82±6.08)%也高于对照组(53.58±4.19)%和空白对照组(52.46±4.93)%(F=10.445;P＜0.01).结论脂质体转染HGF基因能够在缺血半暗带区表达,表达产物能够发挥生物学效应,促进局部血管侧支循环形成.
목적 탐토간세포생장인자(HGF)기인전염대서급성뇌졸중모형후적표체정황급기생물학효응.방법 39지실험용대서,선전법제비성가공성급성대서뇌졸중모형.이용기인중조기술장HGF기인여증강형록색형광단백(EGFP)기인표기적진핵표체재체PIRES2-EGFP진행융합,구건진핵세포표체질립.통과지질체개도법,입체정향하다점주사도대서급성뇌졸중모형적결혈반암대구역행기인전염,전염7 d후단두취대서뇌조직,절편관찰HGF기인재대서뇌내적표체정황;병채용토항인Ⅷ인자상관항원다극륭항체대대서뇌조직진행면역조화염색,현미경하수궤검측5개고배시야하결혈반암대구혈관수량;동시재기인전염전급전염후7 d,응용CT관주소묘대실험서뇌혈류량진행감측,관찰기인전염대뇌혈류량적영향.장대서뇌졸중모형수궤분성3조(매조13지):(1)주사지질체/pIRES2-EGFP-HGF질립적실험조;(2)주사지질체/PIRES2-EGFP공재질립적공재체대조조;(3)공백대조조(미진행주사).결과 매절감정급기인측서증실,HGF기인편단이극륭도PIRES2-EGFP적BamH I화Sal I위점지간.HGF기인전염대서결혈반암대구7 d후,이용형광현미경관찰가견도록색형광단백적표체,용면역조화방법진일보증실료HGF적표체.실험조대서전염국부혈관수량(46.71±7.11)조/5개고배시야,명현다우대조조적(20.43±3.21)조/5개고배시야화공백대조조적(18.00±3.27)조/5개고배시야(F=74.447;P＜0.01);CT관주현시기경사측대뇌반구적뇌혈류량(63.82±6.08)%야고우대조조(53.58±4.19)%화공백대조조(52.46±4.93)%(F=10.445;P＜0.01).결론 지질체전염HGF기인능구재결혈반암대구표체,표체산물능구발휘생물학효응,촉진국부혈관측지순배형성.