CAJ | 학술논문

目的研究帕金森病(PD)患者血清中抗大鼠黑质部膜蛋白IgG抗体的提取方法以及抗体的特异性免疫损伤作用.方法差速离心法粗提SD大鼠黑质质膜,并将其偶联至溴化氢活化的琼脂糖4B(CNBr-activitied-sepharose 4B)上,将20例临床确诊的PD患者血清上样,收集洗脱峰,将洗脱产物通过蛋白A亲和层析柱,收集洗脱峰,间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分别检测其抗原结合活性和纯度.24只雄性SD大鼠随机分为3组,每组8只:PBS组(注射PBS),健康组(注射健康人IgG),PD IgG组(注射PD IgG),对大鼠一侧黑质致密部(SNpc)进行立体定向注射,免疫组化检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性的细胞数.结果层析后的洗脱产物为两条清晰的条带,相对分子质量分别为25 000,50 000,这与IgG轻链和重链相对分子质量的理论值相符合,证明其具有抗原结合活性并达到电泳纯.注射4周后,免疫组化显示PD IgG组注射侧的TH阳性细胞数比非注射侧下降了51%,而健康IgG组仅下降了4%,PBS组未见明显改变.统计学分析注射物对黑质的损伤作用显示,PD IgG组与健康IgG组相比差异有显著意义(P<0.05),PD IgG组与PBS组相比差异也有显著意义(P<0.05).结论用免疫亲和层析法可获得PD血清中抗大鼠黑质部膜蛋白的IgG抗体成分,其对黑质多巴胺能神经元具有免疫损伤作用.
목적연구파금삼병(PD)환자혈청중항대서흑질부막단백IgG항체적제취방법이급항체적특이성면역손상작용.방법차속리심법조제SD대서흑질질막,병장기우련지추화경활화적경지당4B(CNBr-activitied-sepharose 4B)상,장20례림상학진적PD환자혈청상양,수집세탈봉,장세탈산물통과단백A친화층석주,수집세탈봉,간접매련면역흡부실험(ELISA)화SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분별검측기항원결합활성화순도.24지웅성SD대서수궤분위3조,매조8지:PBS조(주사PBS),건강조(주사건강인IgG),PD IgG조(주사PD IgG),대대서일측흑질치밀부(SNpc)진행입체정향주사,면역조화검측락안산간화매(TH)양성적세포수.결과층석후적세탈산물위량조청석적조대,상대분자질량분별위25 000,50 000,저여IgG경련화중련상대분자질량적이론치상부합,증명기구유항원결합활성병체도전영순.주사4주후,면역조화현시PD IgG조주사측적TH양성세포수비비주사측하강료51%,이건강IgG조부하강료4%,PBS조미견명현개변.통계학분석주사물대흑질적손상작용현시,PD IgG조여건강IgG조상비차이유현저의의(P<0.05),PD IgG조여PBS조상비차이야유현저의의(P<0.05).결론용면역친화층석법가획득PD혈청중항대서흑질부막단백적IgG항체성분,기대흑질다파알능신경원구유면역손상작용.