中华预防医学杂志
中華預防醫學雜誌
중화예방의학잡지
CHINESE JOURNAL OF
2007年
z1期
20-24
,共5页
CpG岛%甲基化%色谱法,高效液相
CpG島%甲基化%色譜法,高效液相
CpG도%갑기화%색보법,고효액상
目的 建立准确测定肿瘤组织中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝的含量的方法.方法 利用亚硫酸氢钠修饰-克隆测序法确定胃组织该CpG岛中关键性CpG位点,然后利用限制性内切酶建立了测定该位点甲基化状态的分析法(COBRA),再利用变性高效液相色谱技术进行定量.结果 对2个肿瘤细胞系、2个正常人胃黏膜样品、2对原发性胃癌及其癌旁非癌组织进行分析发现,在该CpG岛的16个CpG位点中,-88位等5个CpG位点的甲基化状态与整个CpG岛的甲基化状态一致;利用限制性内切酶Acil能够区分该位点甲基化状态:在该位点未甲基化时(GTGG)不能酶切,而甲基化时(GCGG)酶切敏感;在变性高效液相色谱仪上甲基化片段和非甲基化片段能够完全分离;根据色谱峰面积可知两者的比例,在1.25%～100%范围内有良好的线性关系,重现性较好;对克隆测序样品进行限制性内切酶-变性高效液相色谱测定,结果与克隆测序一致.结论 建立的限制性内切酶-变性高效液相色谱法能够定量测定SNCG基因CpG岛甲基化.
目的 建立準確測定腫瘤組織中SNCG基因CpG島甲基化拷貝的含量的方法.方法 利用亞硫痠氫鈉脩飾-剋隆測序法確定胃組織該CpG島中關鍵性CpG位點,然後利用限製性內切酶建立瞭測定該位點甲基化狀態的分析法(COBRA),再利用變性高效液相色譜技術進行定量.結果 對2箇腫瘤細胞繫、2箇正常人胃黏膜樣品、2對原髮性胃癌及其癌徬非癌組織進行分析髮現,在該CpG島的16箇CpG位點中,-88位等5箇CpG位點的甲基化狀態與整箇CpG島的甲基化狀態一緻;利用限製性內切酶Acil能夠區分該位點甲基化狀態:在該位點未甲基化時(GTGG)不能酶切,而甲基化時(GCGG)酶切敏感;在變性高效液相色譜儀上甲基化片段和非甲基化片段能夠完全分離;根據色譜峰麵積可知兩者的比例,在1.25%～100%範圍內有良好的線性關繫,重現性較好;對剋隆測序樣品進行限製性內切酶-變性高效液相色譜測定,結果與剋隆測序一緻.結論 建立的限製性內切酶-變性高效液相色譜法能夠定量測定SNCG基因CpG島甲基化.
목적 건립준학측정종류조직중SNCG기인CpG도갑기화고패적함량적방법.방법 이용아류산경납수식-극륭측서법학정위조직해CpG도중관건성CpG위점,연후이용한제성내절매건립료측정해위점갑기화상태적분석법(COBRA),재이용변성고효액상색보기술진행정량.결과 대2개종류세포계、2개정상인위점막양품、2대원발성위암급기암방비암조직진행분석발현,재해CpG도적16개CpG위점중,-88위등5개CpG위점적갑기화상태여정개CpG도적갑기화상태일치;이용한제성내절매Acil능구구분해위점갑기화상태:재해위점미갑기화시(GTGG)불능매절,이갑기화시(GCGG)매절민감;재변성고효액상색보의상갑기화편단화비갑기화편단능구완전분리;근거색보봉면적가지량자적비례,재1.25%～100%범위내유량호적선성관계,중현성교호;대극륭측서양품진행한제성내절매-변성고효액상색보측정,결과여극륭측서일치.결론 건립적한제성내절매-변성고효액상색보법능구정량측정SNCG기인CpG도갑기화.
