CAJ | 학술논문

目的探讨重组人组织型激肽释放酶(HK)基因腺相关病毒载体(rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作用.方法将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中,形成重组腺相关病毒(rAAV-HK)质粒,经聚合酶链反应(PCR)检测和DNA测序后,将rAAV-HK、pAAV-Helper和pAAV-RC 3种质粒通过脂质体共转染293细胞,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK,采用β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT1080中的表达,间接计算病毒滴度,并观察转染基因在传代细胞中的表达.在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组)和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组)48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测两组HUVECs HK mRAN的表达,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 rAVV/HK病毒滴度为6.2×107个/mL,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT1080细胞内稳定持续表达.与对照组比,HK转染组HUVECs HK mRNA表达增加(P<0.001);而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高,P值分别<0.01和<0.05.结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HUVECs,使其HK mRNA表达增加,NOS活性和NO含量升高,此结果为基因治疗人类血管内皮细胞异常提供客观依据.
목적탐토중조인조직형격태석방매(HK)기인선상관병독재체(rAVV/HK)대체외배양적인제정맥내피세포(HUVECs)작용.방법장HK기인정향극륭입선상관병독질립pAAV-MCS중,형성중조선상관병독(rAAV-HK)질립,경취합매련반응(PCR)검측화DNA측서후,장rAAV-HK、pAAV-Helper화pAAV-RC 3충질립통과지질체공전염293세포,포장성대유HK목적기인적중조rAVV/HK,채용β반유당감매원위염색법측정보고기인rAVV/LacZ재HT1080중적표체,간접계산병독적도,병관찰전염기인재전대세포중적표체.재상동적조건하체외분별배양HUVECs(대조조)화rAVV/HK전염적HUVEC(HK전염조)48 h,채용역전록취합매련반응(RT-PCR)기술검측량조HUVECs HK mRAN적표체,병이용초산환원매법화분광광도법분별검측량조HUVECs일양화담(NO)함량화일양화담합매(NOS)활성.결과 rAVV/HK병독적도위6.2×107개/mL,LacZ기인능구재제일전대화제륙대HT1080세포내은정지속표체.여대조조비,HK전염조HUVECs HK mRNA표체증가(P<0.001);이차HK전염조HUVECs세포배양액중NO적함량화NOS활성명현증고,P치분별<0.01화<0.05.결론 HK기인통과중조선상관병독재체가성공전염체외배양적HUVECs,사기HK mRNA표체증가,NOS활성화NO함량승고,차결과위기인치료인류혈관내피세포이상제공객관의거.