河北师范大学学报（自然科学版）
河北師範大學學報（自然科學版）
하북사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HEBEI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
1期
109-112
,共4页
谢莉%窦燕峰%张铎%张丽萍%赵宝华
謝莉%竇燕峰%張鐸%張麗萍%趙寶華
사리%두연봉%장탁%장려평%조보화
普通生酮基古龙酸菌S2%醇醛脱氢酶%免疫酶斑点技术%文库筛选
普通生酮基古龍痠菌S2%醇醛脫氫酶%免疫酶斑點技術%文庫篩選
보통생동기고룡산균S2%순철탈경매%면역매반점기술%문고사선
在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成普通生酮基古龙酸菌S2基因组文库,得到12 000余个转化子.再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清,应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)对文库进行筛选,获得1个阳性克隆K719#.通过检测此基因工程菌的活性,表明在添加辅酶PQQ后,K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达,这为简化Vc的生产工艺奠定了基础.
在Vc生產的第2步髮酵中,普通生酮基古龍痠菌S2能利用醇醛脫氫酶,將L-山梨糖轉化為Vc的前體2-酮基-L-古龍痠(2-KLG).對普通生酮基古龍痠菌S2基因組DNA進行部分酶切,與黏粒載體pKC505連接後,用包裝蛋白進行包裝,轉染大腸桿菌DH5α,構建成普通生酮基古龍痠菌S2基因組文庫,得到12 000餘箇轉化子.再利用純化的醇醛脫氫酶免疫傢兔製備齣閤格抗血清,應用免疫酶斑點技術(Dot-ELISA)對文庫進行篩選,穫得1箇暘性剋隆K719#.通過檢測此基因工程菌的活性,錶明在添加輔酶PQQ後,K719#具有使L-山梨糖轉化為2-KLG的功能,從而使醇醛脫氫酶在大腸桿菌中得到瞭錶達,這為簡化Vc的生產工藝奠定瞭基礎.
재Vc생산적제2보발효중,보통생동기고룡산균S2능이용순철탈경매,장L-산리당전화위Vc적전체2-동기-L-고룡산(2-KLG).대보통생동기고룡산균S2기인조DNA진행부분매절,여점립재체pKC505련접후,용포장단백진행포장,전염대장간균DH5α,구건성보통생동기고룡산균S2기인조문고,득도12 000여개전화자.재이용순화적순철탈경매면역가토제비출합격항혈청,응용면역매반점기술(Dot-ELISA)대문고진행사선,획득1개양성극륭K719#.통과검측차기인공정균적활성,표명재첨가보매PQQ후,K719#구유사L-산리당전화위2-KLG적공능,종이사순철탈경매재대장간균중득도료표체,저위간화Vc적생산공예전정료기출.
