生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
6期
138-141,151
,共5页
廖乐乐%娄世锋%曾翰庆%白凤霞
廖樂樂%婁世鋒%曾翰慶%白鳳霞
료악악%루세봉%증한경%백봉하
重组免疫毒素%IL3-PE38KDEL%纯化复性%质谱鉴定
重組免疫毒素%IL3-PE38KDEL%純化複性%質譜鑒定
중조면역독소%IL3-PE38KDEL%순화복성%질보감정
旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定.利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较高的免疫毒素复性纯化产物,用Westen blotting、质谱、氨基测序等先进技术对产物鉴定. 结果显示,发酵后目的蛋白表达量占总菌体的17.56%,经强阳离子柱层析纯化复性后的目的蛋白纯度达到90%以上,Western blotting、质谱、氨基测序结果均表明,纯化产物分子量为54.9 kD且具有相应的免疫学活性,序列与预期序列完全一致.纯化复性方法对重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性质及纯度有较大影响,因此选择一种适当的纯化复性方法至关重要.
旨在利用簡單的錶達純化工藝,穫得純度較高、有活性的重組免疫毒素IL3-PE38KDEL併對其物理學及免疫學性質進行鑒定.利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌錶達重組免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵體後經一步彊暘離子柱層析得到純度較高的免疫毒素複性純化產物,用Westen blotting、質譜、氨基測序等先進技術對產物鑒定. 結果顯示,髮酵後目的蛋白錶達量佔總菌體的17.56%,經彊暘離子柱層析純化複性後的目的蛋白純度達到90%以上,Western blotting、質譜、氨基測序結果均錶明,純化產物分子量為54.9 kD且具有相應的免疫學活性,序列與預期序列完全一緻.純化複性方法對重組免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性質及純度有較大影響,因此選擇一種適噹的純化複性方法至關重要.
지재이용간단적표체순화공예,획득순도교고、유활성적중조면역독소IL3-PE38KDEL병대기물이학급면역학성질진행감정.이용PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009공정균표체중조면역독소IL3-PE38KDEL,재제취포함체후경일보강양리자주층석득도순도교고적면역독소복성순화산물,용Westen blotting、질보、안기측서등선진기술대산물감정. 결과현시,발효후목적단백표체량점총균체적17.56%,경강양리자주층석순화복성후적목적단백순도체도90%이상,Western blotting、질보、안기측서결과균표명,순화산물분자량위54.9 kD차구유상응적면역학활성,서렬여예기서렬완전일치.순화복성방법대중조면역독소IL3-PE38KDEL적생물성질급순도유교대영향,인차선택일충괄당적순화복성방법지관중요.
