CAJ | 학술논문

目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性.方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达.经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定.将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性.结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带.用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体.纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性.结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础.
목적 구건함결핵분지간균(M.tb)rv2352c기인원핵표체재체,경전화E.coli이표체Rv2352c융합단백,병연구기항원성.방법 용PCR확증M.tb rv2352c기인,극륭입pET30a(+)질립,구건pET30a(+):rv2352c중조질립,양성극륭측서험증정학후전화입표체숙주대장간균BL21(DE3),경IPTG유도Rv2352c단백표체.경Ni+-NTA층석주순화융합단백,통과SDS-PAGE화결핵환자혈청Western blot진행감정.장순화적중조단백분별면역가토,제비항Rv2352c항혈청,항혈청적효개측정채용매련면역흡부시험법(ELISA),취토항혈청여순화단백Rv2352c통과Western blot방법,검측항체특이성.결과 경매절감정화측서분석증실rv2352c원핵표체질립구건정학,SDS-PAGE화Western blot결과현시,재45 kD처정현단일단백조대.용중조단백Rv2352c면역접충후가유도출고적도적특이성항체.순화단백통과Western blot감정증실위목적 단백,유교강적면역원성.결론 성공구건원핵표체중조질립pET30a(+):rv2352c,제비화순화적Rv2352c융합단백구유교호적순도화생물학공능,위진일보연구결핵병적잠재분자표지물전정기출.