上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2011年
5期
551-555,560
,共6页
谢超%王方圆%袁运生%郜尽%朱润芝%韩伟%俞雁
謝超%王方圓%袁運生%郜儘%硃潤芝%韓偉%俞雁
사초%왕방원%원운생%고진%주윤지%한위%유안
肝脏再生%转录因子%酵母双杂交系统%蛋白互作
肝髒再生%轉錄因子%酵母雙雜交繫統%蛋白互作
간장재생%전록인자%효모쌍잡교계통%단백호작
目的 采用酵母双杂交系统研究肝脏再生调控途径转化生长因子β(TGF-β)信号通路中4种转录因子的相互作用.方法 经CCl4腹腔注射诱导建立小鼠肝损伤再生模型,提取模型小鼠肝脏组织总RNA作为模板,经RT-PCR获得cDNA.经肝脏再生基因芯片检测显示差异表达且与TGF-β信号通路相关的激活转录因子3(ATF3)、DNA结合抑制因子3(ID3)、DNA损伤诱导的转录因子3(DDIT3)和LIM蛋白家族成员FHL2(FHL2)作为候选基因,进行基因克隆和载体构建,PCR及DNA测序鉴定.采用酵母双杂交系统进行自激活检测实验和酵母双杂交实验,观察ATF3、FHL2、DDIT3和ID3之间的相互作用.结果 PCR及DNA测序鉴定表明,ATF3、FHL2、DDIT3、ID3基因克隆与载体构建成功.自激活检测显示ATF3、FHL2、DDIT3和ID3不存在自激活现象;酵母双杂交实验发现7对蛋白互作,分别为ID3/ATF3、FHL2/ATF3、ATF3/ATF3、FHL2/FHL2、ID3/FHL2、ID3/ID3和ID3/DDIT3.结论 ATF3、FHL2和ID3间的蛋白互作可能对TGF-β信号通路具有调控作用;蛋白互作网络可作为肝损伤再生机制研究的途径之一.
目的 採用酵母雙雜交繫統研究肝髒再生調控途徑轉化生長因子β(TGF-β)信號通路中4種轉錄因子的相互作用.方法 經CCl4腹腔註射誘導建立小鼠肝損傷再生模型,提取模型小鼠肝髒組織總RNA作為模闆,經RT-PCR穫得cDNA.經肝髒再生基因芯片檢測顯示差異錶達且與TGF-β信號通路相關的激活轉錄因子3(ATF3)、DNA結閤抑製因子3(ID3)、DNA損傷誘導的轉錄因子3(DDIT3)和LIM蛋白傢族成員FHL2(FHL2)作為候選基因,進行基因剋隆和載體構建,PCR及DNA測序鑒定.採用酵母雙雜交繫統進行自激活檢測實驗和酵母雙雜交實驗,觀察ATF3、FHL2、DDIT3和ID3之間的相互作用.結果 PCR及DNA測序鑒定錶明,ATF3、FHL2、DDIT3、ID3基因剋隆與載體構建成功.自激活檢測顯示ATF3、FHL2、DDIT3和ID3不存在自激活現象;酵母雙雜交實驗髮現7對蛋白互作,分彆為ID3/ATF3、FHL2/ATF3、ATF3/ATF3、FHL2/FHL2、ID3/FHL2、ID3/ID3和ID3/DDIT3.結論 ATF3、FHL2和ID3間的蛋白互作可能對TGF-β信號通路具有調控作用;蛋白互作網絡可作為肝損傷再生機製研究的途徑之一.
목적 채용효모쌍잡교계통연구간장재생조공도경전화생장인자β(TGF-β)신호통로중4충전록인자적상호작용.방법 경CCl4복강주사유도건립소서간손상재생모형,제취모형소서간장조직총RNA작위모판,경RT-PCR획득cDNA.경간장재생기인심편검측현시차이표체차여TGF-β신호통로상관적격활전록인자3(ATF3)、DNA결합억제인자3(ID3)、DNA손상유도적전록인자3(DDIT3)화LIM단백가족성원FHL2(FHL2)작위후선기인,진행기인극륭화재체구건,PCR급DNA측서감정.채용효모쌍잡교계통진행자격활검측실험화효모쌍잡교실험,관찰ATF3、FHL2、DDIT3화ID3지간적상호작용.결과 PCR급DNA측서감정표명,ATF3、FHL2、DDIT3、ID3기인극륭여재체구건성공.자격활검측현시ATF3、FHL2、DDIT3화ID3불존재자격활현상;효모쌍잡교실험발현7대단백호작,분별위ID3/ATF3、FHL2/ATF3、ATF3/ATF3、FHL2/FHL2、ID3/FHL2、ID3/ID3화ID3/DDIT3.결론 ATF3、FHL2화ID3간적단백호작가능대TGF-β신호통로구유조공작용;단백호작망락가작위간손상재생궤제연구적도경지일.
