生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
764-768
,共5页
杜刚%江蒙蒙%尹林%王宏萍%周晓明
杜剛%江矇矇%尹林%王宏萍%週曉明
두강%강몽몽%윤림%왕굉평%주효명
1型人免疫缺陷病毒%包膜蛋白gp41%抗原表位%斑点杂交%亲和层析
1型人免疫缺陷病毒%包膜蛋白gp41%抗原錶位%斑點雜交%親和層析
1형인면역결함병독%포막단백gp41%항원표위%반점잡교%친화층석
目的:筛选1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株中包膜蛋白gp41的优势抗原片段,构建具有区域流行代表性的HIV-1 gp41重组抗原,为改进现有HIV-1初筛试剂盒中使用的同类抗原奠定基础.方法:利用免疫斑点杂交和生物信息学方法,从收集自重庆、广州、上海的区域代表性150份HIV-1感染者血清标本中筛选gp41抗原性强的候选样本,利用RT-PCR及巢式PCR方法扩增包含重要抗原表位决定蔟的gp41基因片段,与原核表达载体pQE30连接,转化大肠杆菌M15构建gp41重组抗原表达菌株,表达后经亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果:兔源HRP标记的gp41多抗能识别标本中gp41抗原性差异,得到候选样本,扩增包含gp41主要抗原表位片段；构建了包含gp41抗原表达簇的重组原核表达质粒,表达、纯化后经His标签抗体Western印迹鉴定为阳性.结论:高纯度的重组优势gp41抗原的构建和鉴定,为进一步改进现有HIV初筛诊断奠定了基础.
目的:篩選1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中國流行株中包膜蛋白gp41的優勢抗原片段,構建具有區域流行代錶性的HIV-1 gp41重組抗原,為改進現有HIV-1初篩試劑盒中使用的同類抗原奠定基礎.方法:利用免疫斑點雜交和生物信息學方法,從收集自重慶、廣州、上海的區域代錶性150份HIV-1感染者血清標本中篩選gp41抗原性彊的候選樣本,利用RT-PCR及巢式PCR方法擴增包含重要抗原錶位決定蔟的gp41基因片段,與原覈錶達載體pQE30連接,轉化大腸桿菌M15構建gp41重組抗原錶達菌株,錶達後經親和層析純化、SDS-PAGE和Western印跡鑒定.結果:兔源HRP標記的gp41多抗能識彆標本中gp41抗原性差異,得到候選樣本,擴增包含gp41主要抗原錶位片段；構建瞭包含gp41抗原錶達簇的重組原覈錶達質粒,錶達、純化後經His標籤抗體Western印跡鑒定為暘性.結論:高純度的重組優勢gp41抗原的構建和鑒定,為進一步改進現有HIV初篩診斷奠定瞭基礎.
목적:사선1형인면역결함병독(HIV-1)중국류행주중포막단백gp41적우세항원편단,구건구유구역류행대표성적HIV-1 gp41중조항원,위개진현유HIV-1초사시제합중사용적동류항원전정기출.방법:이용면역반점잡교화생물신식학방법,종수집자중경、엄주、상해적구역대표성150빈HIV-1감염자혈청표본중사선gp41항원성강적후선양본,이용RT-PCR급소식PCR방법확증포함중요항원표위결정족적gp41기인편단,여원핵표체재체pQE30련접,전화대장간균M15구건gp41중조항원표체균주,표체후경친화층석순화、SDS-PAGE화Western인적감정.결과:토원HRP표기적gp41다항능식별표본중gp41항원성차이,득도후선양본,확증포함gp41주요항원표위편단；구건료포함gp41항원표체족적중조원핵표체질립,표체、순화후경His표첨항체Western인적감정위양성.결론:고순도적중조우세gp41항원적구건화감정,위진일보개진현유HIV초사진단전정료기출.
