南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
2期
165-168,172
,共5页
刘彬%黄佳城%周迎春%孙学刚%曾文璧%李杏%臧书文%郝文文
劉彬%黃佳城%週迎春%孫學剛%曾文璧%李杏%臧書文%郝文文
류빈%황가성%주영춘%손학강%증문벽%리행%장서문%학문문
慢病毒%RNA干扰%LOX-1%氧化应激%凋亡
慢病毒%RNA榦擾%LOX-1%氧化應激%凋亡
만병독%RNA간우%LOX-1%양화응격%조망
目的 构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体( LOX-1) RNA干扰慢病毒表达载体并观察LOX-1在氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 设计针对大鼠LOX-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,构建慢病毒载体pLL3.7-LOX1.慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒.慢病毒侵染H9C2大鼠心肌细胞,RT-PCR鉴定对LOX-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测LOX-1对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响.结果 通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制LOX-1能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较均有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建靶向大鼠LOX-1基因RNAi慢病毒载体,LOX-1激活可能在H2O2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用.
目的 構建大鼠凝集素養氧化低密度脂蛋白受體( LOX-1) RNA榦擾慢病毒錶達載體併觀察LOX-1在氧化應激誘導心肌細胞凋亡中的作用.方法 設計針對大鼠LOX-1的shRNA序列,將shRNA序列插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒載體中,構建慢病毒載體pLL3.7-LOX1.慢病毒載體及包裝載體dR8.9、VSVG共轉染293FT細胞包裝慢病毒.慢病毒侵染H9C2大鼠心肌細胞,RT-PCR鑒定對LOX-1抑製效率,CCK-8、Hochest33258染色檢測LOX-1對H2O2誘導H9C2心肌細胞凋亡的影響.結果 通過雙酶切鑒定,證實shRNA正確插入慢病毒載體,DNA測序證實插入的序列正確,抑製LOX-1能抑製H2O2誘導的細胞活力下降,減輕H2O2誘導的心肌細胞凋亡,與H2O2組比較均有統計學意義(P＜0.01).結論 成功構建靶嚮大鼠LOX-1基因RNAi慢病毒載體,LOX-1激活可能在H2O2誘導心肌細胞凋亡中髮揮重要作用.
목적 구건대서응집소양양화저밀도지단백수체( LOX-1) RNA간우만병독표체재체병관찰LOX-1재양화응격유도심기세포조망중적작용.방법 설계침대대서LOX-1적shRNA서렬,장shRNA서렬삽입도pLentiLox3.7(pLL3.7)만병독재체중,구건만병독재체pLL3.7-LOX1.만병독재체급포장재체dR8.9、VSVG공전염293FT세포포장만병독.만병독침염H9C2대서심기세포,RT-PCR감정대LOX-1억제효솔,CCK-8、Hochest33258염색검측LOX-1대H2O2유도H9C2심기세포조망적영향.결과 통과쌍매절감정,증실shRNA정학삽입만병독재체,DNA측서증실삽입적서렬정학,억제LOX-1능억제H2O2유도적세포활력하강,감경H2O2유도적심기세포조망,여H2O2조비교균유통계학의의(P＜0.01).결론 성공구건파향대서LOX-1기인RNAi만병독재체,LOX-1격활가능재H2O2유도심기세포조망중발휘중요작용.
